Isolation of a thrombin-like enzyme from venom of Bothrops alternatus snakes. Action on plasma from different mammalian species

LEIVA LAURA CRISTINA; MARUÑAK SILVANA; RODRÍGUEZ, JUAN PABLO; FIDANZA NOEMÍ; FERNANDEZ, DANIELA; RIOS, ELVIO; ACOSTA, OFELIA

CORRIENTES, Argentina

Congreso; XXXIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; 2001

Las intoxicaciones por ofidios del género Bothrops se caracterizan por presentar mionecrosis local y alteraciones del sistema de coagulación. Este último es debido a la presencia, en la saliva del reptil, de enzimas con actividad tipo trombina, que consumen el fibrinógeno y vuelven incoagulable la sangre del accidentado. En este trabajo se presenta el aislamiento de una enzima con actividad tipo trombina a partir de veneno de yarará que habita en el nordeste de Argentina, y el estudio del efecto de esta enzima sobre los niveles de fibrinógeno en ratones. La técnica consistió en una cromatografía de intercambio iónico, eluyendo la enzima de interés por aumento de la fuerza iónica del buffer, seguida de cromatografía de filtración molecular, (Sephadex ® G100), eluyendo con buffer glicina, pH= 4.4, y testeando actividad enzimática a través de la medida de los tiempos de coagulación de plasma humano citratado. Las fracciones con actividad trombínica se mezclaron en un pool y se estudió su acción biológica. Para ello se inocularon ratones de la cepa Wistar de 20+ 2g de peso (n=4) con 10 μg de enzima purificada, en el músculo gastronemio. Se les extrajo sangre a distintos tiempos, evaluando el contenido de fibrinógeno plasmático por método enzimático. Los resultados mostraron un consumo progresivo de fibrinógeno volviéndose incoagulable el plasma a las 3 horas de inoculación, para luego aumentar sus niveles a partir de las 6 horas. Estos resultados demuestran la rápida reposición de fibrinógeno por parte del animal. Tales observaciones demuestran que, los trastornos de la coagulación que caracterizan esta intoxicación, por sí solos, no necesariamente conllevan a la mortalidad del individuo.