Respuesta inflamatoria inducida por veneno de B. jararacussu en macrófagos murinos de línea Raw 264.7

SOTO, SUSANA; MARUÑAK SILVANA; BRESER, MARÍA; RODRIGUEZ JUAN PABLO; ACOSTA OFELIA; LEIVA LAURA CRISTINA; RIVERO, VIRGINIA

La Falda, Córdoba

Congreso; LVI Reunión anual de la Socidad argentina de Inmunología.; 2008

En Argentina el género Bothrops es el responsable de la mayoría de los accidentes ofídicos, ocasionando efectos multisistémicos asociados a hemorragias, disturbios de la hemostasia y perturbaciones hemodinámicas. En este tipo de envenenamientos se observa además una importante reacción inflamatoria. El objetivo del presente trabajo fue analizar mediadores inflamatorios generados al estimular células macrofágicas de la línea RAW 264.7 con veneno de B. jararacussu. Para ello macrófagos murinos de la línea RAW 264.7 fueron incubados por distintos períodos de tiempo con dosis sub-citotóxicas de veneno y se analizó actividad arginasa (producción de urea), secreción de Oxido Nítrico (técnica de Griess), y citoquinas inflamatorias como IL-6 y TNF-α (ELISA) en sobrenadantes de cultivo. Se estudió además la expresión de RNAm para citoquinas y quimiocinas por RT-PCR y la expresión de moléculas del CMH-II y molécula co-estimulatoria CD80 por IF. Los resultados obtenidos al incubar células RAW 264.7 con distintas concentraciones de veneno demostraron un incremento en la producción de ON (p>0.05) acompañado por una disminución en la producción de urea (p>0.05) en relación a los valores hallados al incubar las células sólo con medio. Células RAW incubadas con veneno incrementaron notoriamente la expresión de RNAm para IL-6, IL-1 β y levemente la expresión de RNAm para TNF-α comparado con los expresados por células incubadas solo con medio. Se utilizó RNAm de GADPH para ajustar la concentración de RNA en cada ensayo. Al analizar los niveles de citoquinas presentes en sobrenadantes de cultivos observamos que las células RAW incubadas con veneno aumentaron significativamente los niveles IL-6 y levemente los niveles de TNF-α. La incubación de células RAW con veneno aumentaron la expresión de RNAm para CCL2, CCL3, CCL5 y CXCL10 comparado con los niveles expresados por células incubadas solo con medio. Al analizar la expresión de marcadores de superficie asociados a activación celular observamos que células RAW incubadas con veneno incrementaron la expresión de moléculas del CMH-II y molécula co-estimulatoria CD80. Nuestros resultados demuestran que el veneno de B. Jararacussu, in-vitro, y a concentraciones sub- citotóxicas, es capaz de estimular células de la línea RAW activando la vía de producción de óxido nítrico e inhibiendo la producción de urea. La incubación de las células con veneno indujo un incremento en la expresión de citocinas inflamatorias y quimiocinas (IL-1β, IL-6, TNF-α, CCL2, CCL3, CCL5 y CXCL10) y aumento en la expresión de marcadores de superficie asociados con activación celular como CMH-II y CD80. Estos resultados nos permiten concluir que el veneno de B. Jararacussu, es inductor de mediadores inflamatorios que podrían estar relacionados con el importante infiltrado inflamatorio observado en este envenenamiento bothrópico.