Comparación de medios de cultivos en la recuperación de Yersinia enterocolitica de alimentos

FAVIER GABRIELA ISABEL; ESCUDERO MARÍA ESTHER; LUCERO ESTRADA CECILIA STELLA MARYS; STEFANINI DE GUZMÁN ANA MARÍA

Buenos Aires

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano de Microbiología. X Congreso Argentino de Microbiología. Sociedad Argentina de Microbiología; 2004

Asociación Argentina de Microbiología

Yersinia enterocolitica es una enterobacteria emergente que causa infección en el hombre. La escasa recuperación de este microorganismo desde muestras clínicas, de alimentos y del medio ambiente, ha sido atribuida a la limitada sensibilidad de los métodos de cultivo que resultan inefectivos para el aislamiento simultáneo de todos los biotipos y serotipos conocidos. En este estudio se propuso comparar combinaciones de cuatro métodos de enriquecimiento y dos medios de aislamiento en la recuperación de dos cepas virulentas de Y enterocolitica O:9 inoculadas en chorizo de cerdo, e investigar el efecto que ejerce la flora natural. Muestras de 25 g cada una fueron divididas en los siguientes grupos: no inoculadas-no esterilizadas (NI/NE) para investigación de flora natural, inoculadas-esterilizadas (I/E) e inoculadas-no esterilizadas (I/NE) con 1,6 x 10e8 ufc/ml de Y. enterocolitica W 1024 0:9 (cepa de referencia) ó Y. enterocolitica B2 0:9: cepa aislada previamente de huevo de gallina en nuestro laboratorio. Una muestra de cada grupo se colocó en una bolsa de polietileno estéril con 225 ml de buffer fosfato salino adicionado con sorbitol 1% y sales biliares 0.15%, pH 7,6 (PBS), se homogeneizó en un digestor por 90 s a 25°C y se fraccionó en distintas alícuotas, las que fueron sembradas en: a) caldo irgasan-ticarcilina-clorato de potasio (ITC) 3 d a 22°C, b) caldo tripticase soja (TSC) 24 h a 22°C con posterior transferencia a caldo modificado de Rappaport (MRB) 4 d a 22°C, c) TSC 24 h a 22 °C con pasaje subsiguiente a caldo bilis-oxalato-sorbosa (BOS) 5 d a 22°C, y d) PBS 21 d a 4°C. Desde cada uno de ellos se sembraron 100 µl en agar tripticase soja (TSA), agar Mac Conkey (MC) y agar irgasan-novobiocina (IN). Colonias con aspecto característico del género Yersinia fueron ensayadas por Gram, pruebas bioquímicas y de virulencia para confirmación. Los valores medios del recuento final en TSA, MC e IN se expresaron en ufci/ml y fueron comparados con los valores medios del recuento inicial del dia 0 mediante análisis de varianza y t-student. En el grupo l/E, no se observó diferencia significativa (p< 0,05) en la recuperación de ambas cepas por las cuatro técnicas de enriquecimiento. Las mayores recuperaciones se produjeron con TSC-MRB-IN y TSC-BOS-MC donde se lograron incrementos de 7,85 y 7,12 ciclos log, respectivamente, en comparación con el recuento inicial. PBS-MC también mostró una recuperación significativa en el orden de 7.48 log pero presentó la desventaja de un mayor tiempo de incubación. En el grupo I/NE: la flora natural enmascaró totalmente a Y. enterocolitica en los medios ITC y TSC-MRB y ésta sólo se recuperó en los restantes. En el grupo NI/NE: las mayores inhibiciones de la flora natural se produjeron al emplear ITC-IN y PBS-IN. En este grupo se recuperaron 3 cepas de Y. enterocolitica. A partir de los resultados de este trabajo, se proponen TSC-MRB-IN como la mejor combinación de medios para la recuperación de Y. enterocolitica serotipo 0:9 por requerir menor tiempo de incubación en ausencia de flora natural, y TSC-BOS-MC por menor tiempo de incubación en presencia de flora natural.