INVESTIGADORES
LUCERO ESTRADA Cecilia Stella Marys
congresos y reuniones científicas
Título:
Comparación de métodos de extracción de ADN para la detección de Yersinia enterocolitica por nested ? PCR desde alimentos cárnicos
Autor/es:
LUCERO ESTRADA CECILIA STELLA MARYS; VELÁZQUEZ LIDIA DEL CARMEN; DI GENARO SILVIA; STEFANINI DE GUZMÁN ANA MARÍA
Lugar:
Mendoza
Reunión:
Jornada; XII Jornadas Argentinas de Microbiología. I Jornadas Conjuntas de Microbiología, Infectología y Alergia e Inmunología de Cuyo; 2006
Resumen:
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica muy usada para la detección de distintas bacterias patógenas. En alimentos es posible la presencia de compuestos que podrían actuar como inhibidores de la PCR. En este trabajo se compararon dos métodos de extracción de ADN para la identificación de Yersinia enterocolitica desde alimentos cárnicos, mediante la detección del gen yadA por nested-PCR. Se realizaron diluciones seriadas de Y. enterocolitica WI024 0:9 (+) para obtener concentraciones de 10e4 ? 0 ufc/ml. Se tomó l ml de cada una de estas concentraciones y se inoculó en 10 g de chorizo de cerdo. Estas muestras fueron colocadas en 90 ml de caldo tripticase saja (TSC) a 25°C por 16 h. Se tomó l ml del cultivo y se realizó la extracción de ADN con las siguientes técnicas: a) kit comercial Prepman Ultra (Apply Biosystem) y b) extracción con fenol-cloroformo-isoamílico basado en el protocolo de Fontana y col. Se usaron para la nested-PCR dos pares de primers para la secuencia nucleotídica del gen yadA. Adicionalmente se tomó l ml de un cultivo joven de Y. enterocolitica para realizar la extracción de ADN y, a partir de una concentración de 600 ug/ml de ADN puro, se realizaron diluciones seriadas 1:10. Con el procedimiento (a) se detectó hasta l ufc/ml, mientras que con el (b) hasta 10 ufc/ml. Con las dos técnicas se detectó hasta 600 fg/ml de ADN puro. Los dos métodos ensayados eliminaron los inhibidores de PCR que pudieran estar en este alimento. Se obtuvo una mayor sensibilidad con el kit comercial. Este método de extracción de ADN y nested-PCR se podrá aplicar en la detección de Y. enterocolitica patógena en otros alimentos.
