Peroxidasas en semillas de girasol

M.E. FERNANDEZ; M.D. GROPPA; M.L. TOMARO

Villa Giardino, Córdoba, Argentina

Congreso; XXXI Reunión Anual de SAIB; 1995

Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular

  Las peroxidasas son hemoproteínas que catalizan la oxidación de una amplia variedad de sustratos utilizando H2O2. Están ampliamente distribuidas en las plantas superiores donde se cree que están implicadas en la lignificación, el metabolismo de auxinas y una variedad cada vez mayor de posibles funciones. Con el objetivo de estudiar la expresión de peroxidasas en función del desarrollo de la planta hemos comenzado a estudiar las peroxidasas de girasol, especie en la que aún no han sido descriptas. Trabajamos en esta primera etapa con semillas, donde la expresión de estas enzimas aún no ha sido influida por el desarrollo  o factores ambientales. Un homogenato de semillas fue capaz de oxidar pirogalol (sustrato típico de peroxidasas) en presencia de H2O2 y también ácido indol acético (AIA) con distintos requerimientos. Luego de una ultracentrifugación, la actividad permaneció en la fracción soluble, pero se activó en presencia de la fracción de membranas. El 100% de la actividad se recuperó luego de una columna de DEAE en la fracción catiónica. La actividad de pirogalol peroxidasa se inhibió un 85% en presencia de CN- 1 mM. La actividad de AIA oxidasa eluyó junto con la de pirogalol peroxidasa de la columna de DEAE. La actividad de AIA oxidasa no requiere H2O2 a semejanza de lo que ocurre con otras peroxidasas, y no se inhibió con catalasa sugiriendo la formación de peróxidos unidos al grupo prostético. Por electroforesis en geles de poliacrilamida para proteínas catiónicas, se detectaron dos isoenzimas por tinción específica para hemoproteínas (bencidina-H2O2). Este resultado, junto con la inhibición por CN- y la falta de actividad de pirogalol peroxidasa en ausencia de H2O” sugieren fuertemente la presencia de verdaderas peroxidasas con estructura hemoproteica, diferenciándose de posibles polifenol oxidasa. Se acepta que las peroxidasas aniónicas y catiónicas están reguladas independientemente. Los resultados también sugieren que las peroxidasas catiónicas son las primeras que se expresan en girasol.