ISOENZIMAS DEL COMPLEJO CROTOXINA COMO POTENCIAL INMUNOGENO EN LA PRODUCCIÓN DE SUERO ANTIOFÍDICO

FUSCO LUCIANO SEBASTIAN; HUANCAHUIRE-VEGA S; PONCE SOTO L; ACOSTA OFELIA; RODRÍGUEZ JUAN PABLO; LEIVA L

Mar del Plata

Congreso; Saic-Safis-Safe; 2013

SAFE

Trabajos previos demostraron la aplicabilidad de un plan alternativo para la producción de suero anti crotalico basado en la pre-inmunización con fosfolipasa A2. La PLA2 es el componente principal de la crotoxina, responsable de la letalidad pero que, aislada, es sensiblemente menos tóxica. Su acción se basa en el bloqueo de la transmisión a nivel de la placa neuromuscular, siendo potenciada por un polipéptido, crotapotín. En el presente trabajo se aislaron isoformas de la PLA2 y crotapotín por cromatografía (RP-HPLC), como así también se secuenciaron las isoformas enzimáticas. A partir de las mismas se evaluó el efecto farmacológico de cada una de las isoformas y su combinación con los diferentes crotapotines, a fin de hallar la entidad molecular menos toxica y, por ende, un mejor inmunógeno. A partir de un pool de veneno de Crotalus durisuss terrificus se se purificaron, en dos pasos cromatográficos, tamiz molecular y fase reversa, 4 isoformas de la PLA2 (P9a, P9b, P10a, P10b) y 3 del crotapotin (Ct1, Ct2, Ct3). A la vez se secuenciaron las primeras, mediante espectrometría de masa en tándem. Se ensayaron las actividades neurotóxicas en preparados de músculo biventer de pollo de las diferentes isoenzimas y combinaciones de ellas con las isoformas de crotapotín. Las PLA2 aisladas exhibieron diferente hidrofobicidad, de allí que su elución en la RP-HPLC se resolvió en 4 picos diferenciables, y en sus secuencias primarias, que aunque mínimas (