Estudio funcional de la modulacion del factor de transcripcion NF-kappB

DE LEO S.A.; MAZAIRA G.I.; MOLINARI A.; GALIGNIANA M.D.; ERLEJMAN A.G.

Mar del Plata

Congreso; LVII Reunion Cientifica Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2012

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

El factor de transcripcion NF-kB (Rel A/p50) regula genes involucrados en la inflamacion, diferenciacion, muerte celular y promocion de tumores. Su activacion es mediada por la fosforilacion del inhibidor lkB y posterior degradacion, lo que libera a NF-kB para translocar al nucleo. Previamente observamos que las FK506 binding proteins (FKBPs) modulan la actividad transcripcional NF-kB. Las FKBPs se caracterizan por presentar un dominio con actividad enzimatica de peptidil-prolil-cis/trans-isomerasa (PPIasa) y un dominio TPR (series de 34 aminoacidos) de interaccion con otras proteinas. Resultados previos del laboratorio demostraron que la proteina FKBP51 es capaz de inhibir la activacion de NF-kB inducida por PMA (¨ester de forbol), mientras que FKBP52 estimula su activacion, en forma PPIasa dependiente. El objetivo de este trabajo fue estudiar el efecto funcional de esta modulacion. Para esto se realizaron ensayos de gen reportero para NF-kB en celulas HEK 293T estimuladas con PMA, y se observa que el efecto de FKBP52 fue revertido por cotransfeccion con FKBP51. Se logro transfectar en forma estable celulas HEK 293 (no T) con el plasmido de expresion pC-Neo-hFKBP51, por seleccion con el antibiotico G418. Al repetir el ensayo de sobreexpresion de FKBP52 en las celulas Hek 293 51+, no se observo una estimulacion en la actividad de NF-kB inducida por PMA. Ademas en estas mismas celulas se evaluo la proliferacion celular, en comparacion con sus pares wild type (wt), encontrando que la sobreexpresion de FKBP51 aumenta significativamente la proliferacion celular. Finalmente encontramos en las celulas Hek 293 51+, al igual que en las wt  Rel A co-inmunoprecipito con FKBP51. Concluimos que FKBP51 y FKBP52 modulan la actividad transcripcional de NF-kB actuando en forma contrapuesta. Especulamos que el efecto observado sobre la proliferacion celular podria explicar una de las funciones biologicas de las FKBPs en celulas tumorales donde se encuentran sobreexpresada FKBP51