Caracterizacion de la modulacion del factor de transcripcion NF-kB por proteinas FKBPs

ERLEJMAN A.G.; MOLINARI A.; MAZAIRA G.; GALIGNIANA M.D.

Congreso; LVI Reunion Cientifica Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2011

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

El factor de transcripción NF-kB (RelA/p50) regula genes involucrados en la inflamación, diferenciación y muerte celular. Su activación es mediada por la fosforilación del inhibidor lkB y posterior degradación, lo que libera a NF-kB para translocar al núcleo. Previamente observamos que las FK506 binding proteins (FKBPs) modulan la actividad transcripcional NF-kB. Encontramos que FKBP51 es capaz de inhibirlo, mientras que FKBP52 estimula su activación. Las FKBPs se caracterizan por presentar un dominio con actividad enzimática de peptidil-prolil-cis/trans-isomerasa (PPIasa) y un dominio TPR (series de 34 aminoácidos) de interacción con otras proteínas. El objetivo de este trabajo fue estudiar las características de esta modulación. En células HEK 293T estimuladas con PMA (100ng/ml), se realizaron ensayos utilizando un gen reportero respondedor a NF-kB. El efecto de FKBP52 fue revertido por cotransfección con FKBP51. Asimismo, células HEK 293 que sobre-expresan de manera estable a FKBP51 al ser transfectadas con FKBP52 no se observó estimulación en la actividad de NF-kB inducida por PMA. La preincubación con FK506 (inhibidor de la actividad PPIasa) afecto la estimulación mediada por FKBP52, mientras que no modificó el efecto inhibitorio de FKBP51 sobre NF-kB. La competencia, por cotransfección, del dominio TPR disminuyó el efecto modulador observado para ambas FKBPs. Se estudió la cinética de translocación nuclear de NF-kB por IFI, donde FKBP52 aumentó el tiempo de permanencia de NF-kB en el núcleo mientras que FKBP51 inhibió parcialmente su translocación. FKBP51 Co-IP con RelA, desapareciendo del complejo luego del estímulo con PMA. Concluimos que FKBP51 y FKBP52 modulan la actividad transcripcional de NF-kB actuando en forma contrapuesta, siendo relevante la actividad PPIasa de FKBP52 así como a la interacción con otras proteínas mediada por dominios TPR. Especulamos que este efecto podría tener lugar tanto a nivel de la translocación de NF-kB y/o en su sitio promoto