La inmunofilina FKBP52 estimula la activacion del factor de transcripcion NF-kappaB

ERLEJMAN, A.G.; MOLINARI A.; MAZAIRA G.; VECCHIONE M.B.; GALIGNIANA M.D.

Mar del Plata

Congreso; LV Reunion Cientifica Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica; 2010

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica

El factor de transcripcion NF-kB (RelA/p50) participa en la regulacion de genes involucrados en la inflamacion, la diferenciacion y la muerte celular. Su activacion es mediada por la fosforilacion del inhibidor lkB mediante la quinasa IKK, y luego transloca al nucleo. Resultados previos de nuestro laboratorio demostraron que la inmunofilina (INM) de alto peso molecular FKBP51 (FK506-binding protein 51) inhibe la actividad transcripcional de NF-kB. Las INMs FKBP51 y FKBP52 participan en el retrotransporte de receptores de esteroides regulando su actividad transcripcional de forma mutuamente excluyente. El objetivo de este trabajo fue estudiar a FKBP52 como posible modulador de la actividad transcripcional de NF-kB. Utilizando protinas purificadas, demostramos que GST-FKBP52 coinmunoprecipita con HA-RelA, sugiriendo que ambas proteinas pueden formar complejos. Luego se evaluo por ensayos de EMSA la capacidad de union de NF-kB al DNA inducida por el ester de forbol PMA; y se observo que mientras FKBP52 incremento tal propiedad, FKBP51 la inhibio. Se transfectaron celulas HEK-293T con un gen de reporte cuyo promotor responde a NF-kB, y se cuantifico la respuesta transcripcional en presencia de cantidades crecientes de FKBP52 (0,1-3 microgr). FKBP52 estimulo la actividad de luciferasa de forma concentracion-dependiente, incrementando hasta 8 veces la activacion inducida por PMA. Este efecto fue abolido tanto en celulas HEK-293 que sobreexpresan de manera estable a FKBP51, como en celulas HEK-293 convencionales cotransfectadas con ambas INMs. Estos resultados sugieren que ambas INMs estarian actuando en forma contrapuesta. Por ultimo, se estudio la cinetica de translocacion nuclear de NF-kB por IFI, observandose que FKBP52 aumenta el tiempo de permanencia de NF-kB en el nucleo. Concluimos que FKBP52 actua estimulando la actividad transcripcional de NF-kB. Especulamos que este efecto de FKBP52 podria tener lugar tanto a nivel de la translocacion de NF-kB y/o en su sitio promotor