Mecanismo de retrotransporte citoplasmático, importación nuclear, transformación y exportación del receptor de mineralocorticoides

ERLEJMAN A.G.; MONTE M.; PIWIEN PILIPUK G.; GALIGNIANA M.D.

Ciudad de Mar del Plata, Argentina.

Congreso; LIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas y Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2008

Sociedad Argentina de Investigaciones Clínicas y Sociedad Argentina de Fisiología

Previamente reportamos que hsp90 es requerida para el retrotransporte de GR, implicando que la transformación (o disociación de hsp90) podría ser un evento nuclear. El objetivo de este trabajo fue estudiar si la maquinaria de retrotransporte de MR es similar, evidenciar adónde ocurre la transformación y cómo MR es exportado del núcleo. Al inmunoprecipitar (IP) a MR se co-IP a hsp90, hsp70, p23, FKBP51, FKBP52, tubulina, dineína, p150Glued y p50/dinamitina. Se recuperó una mayor cantidad de tubulina cuando las células se preincubaron con taxol y se homogenizaron en presencia de taxol y GTP para evitar la despolimerización de los microtúbulos. También se evidenció colocalización de MR con microtúbulos en células fijadas por cross-linking con p-formaldheído. La especificidad de la señal fue demostrada por bloqueo con tubulina pura o con péptido flag (para flag-MR). La incubación de las células con esteroide seguido por la IP de MR demostró que FKBP52 y dineína son reclutadas y que FKBP51 es disociada. Se recuperó al complejo MR•hsp90•FKBP52•dineína en el nucleoplasma hasta 10 min post-agregado de esteroide, cuando MR ya es totalmente nuclear. La fracción nuclear de MR disminuyó cuando se interfirió la maquinaria de transporte con inhibidores de hsp90, por sobreexpresión de los péptidos TPR o PPIasa (los que asocian a FKBP52 con hsp90 y dineína, respectivamente), o por sobreexpresión de p50/dinamitina, lo que desensambla complejos dineína/dinactina. La translocación nuclear de MR se inhibió en células MEF FKBP52-/- y se recuperó por transfección de FKBP52. La exportación nuclear de MR fue insensible a leptomicina B, se favoreció por sobreexpresión del péptido TPR y se inhibió con un péptido que incluye al dominio DBD. Concluimos que MR se retrotransporta de manera activa vía el complejo hsp90•FKBP52•proteínas motoras, se transforma en el núcleo, y se exporta por un mecanismo independiente de CRM1 en el que participan proteínas TPR y el dominio DBD del receptor.