“ TcBDF3…leyendo el código de la tubulina?”.

ALONSO VL; VILLANOVA GV; TROCHINE A.; CRIBB P; SERRA EC

Santa Fe

Congreso; XXIII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología (SAP); 2009

SAP

TcBDF3 es una proteína de Trypanosoma cruzi que presenta un bromodominio en la región N-terminal y una región C-terminal rica en aminoácidos básicos y ácidos. El bromodominio es un dominio eucariota conservado estructuralmente, presente en proteínas nucleares, como acetiltransferasas, remodeladores de la cromatina o factores de transcripción, y capaz de reconocer lisinas acetiladas. Se ha propuesto su función como dominio “lector” de esta modificación postraduccional (MPT), principalmente en histonas, y como módulo de interacción proteína-proteína. Utilizando anticuerpos purificados obtenidos contra BDF3 recombinante, se verificó la expresión la proteína en todos los estadios de vida de T. cruzi, por ensayos de Westen Blot (WB) e inmunofluorescencia (IF). Llamativamente se observó por IF que la proteína cambia de localización subcelular a lo largo del ciclo de vida del parásito, siendo citoplasmática en epimastigotes y amastigotes, y flagelar en tripomastigotes y tripomastigotes metacíclicos. Este cambio durante la diferenciación celular, fue estudiado con mayor detalle realizando ensayos de metaciclogénesis in vitro e IF. La localización subcelular, fue verificada mediante WB sobre extractos de parásitos permeabilizados selectivamente con digitonina, corroborándose la presencia citoplasmática de la proteína en epimastigotes. Dados estos resultados, nos planteamos la posibilidad de una asociación de TcBDF3 con la a-tubulina, ya que esta proteína se encuentra acetilada en los microtúbulos de T. cruzi. Para esto realizamos IFs con anticuerpos a-TcBDF3 y a-a-tubulina acetilada, observándo una co-localización parcial. También se realizaron estudios por inmunoprecipitación (IP), así como IF y WB de citoesqueletos. En todos los casos los resultados mostraron la interacción entre TcBDF3 y α-tubulina. Por otra parte, los ensayos de IP con a-TcBDF3 y posterior tinción con plata, sugieren que la proteína estaría asociada además a otros polipéptidos. Más estudios están siendo realizados. En este trabajo presentamos por primera vez una proteína con bromodominio involucrada en procesos no nucleares. La presencia de TcBDF3 asociada a a-tubulina acetilada y su cambio de localización celular durante la diferenciación, sugerirían a la acetilación como una posible señal para este proceso. Esto apoyaría la hipótesis de un código de la tubulina para la regulación de eventos celulares, similar al de las histonas, con la presencia de MPT y de proteínas capaces de reconocerlas.