Inmunoensayo quimioluminométrico asistido por filtración “FAL-ELISA” para titular IgM anti piscirickettsia salmonis en sueros de salmones vacunados: aplicación en ensayos de potencia vacunal

M.A. LAVORIA, M. WILDA, M ERGUIZ, O. FRANCO MAHECHA, A. CAPOZZO

Buenos Aires, Argentina

Congreso; III Jornadas de la Asociación Argentina de Inmunología Veterinaria; 2010

La tendencia actual consiste en refinar técnicas que disminuyan el uso de animales para la evaluación de productos biológicos veterinarios, reemplazando el desafío con patógenos vivos por serología. Las pruebas de eficacia de vacunas para salmónidos se realizan exclusivamente mediante desafío en la especie blanco. Las técnicas serológicas tradicionales aplicada a sueros de salmón no han sido eficaces debido a la alta señal inespecífica (background) de estas muestras y a la muy baja concentración de una única inmunoglobulina (IgM) de baja afinidad. Hemos desarrollado una técnica que permite titular IgM de salmón contra P. salmonis evitando los inconvenientes propios de este modelo. Se filtraron diluciones de suero de salmones inmunizados con vacunas inactivadas o recombinantes a través de microplacas con base de PVDF previamente recubiertas con un lisado de P. salmonis. La filtración disminuyó el background y concentró la IgM específica. La detección se realizó con dos anticuerpos monoclonales seguido de incubación con el sustrato (luminol / peróxido) aumentando la sensibilidad del sistema. Los sueros fueron titulados por FAL-ELISA y se estableció una correlación con los valores del porcentaje relativo de sobrevida respecto del grupo control sin vacunar (RPS) obtenidos en los ensayos de desafío. La titulación por FAL ELISA permitió clasificar a las vacunas según su potencia. Esta técnica constituye una alternativa in vitro a los ensayos in vivo de vacunas contra P.salmonis observando el objetivo de sustituir, reducir y perfeccionar el uso de animales para el control de calidad de inmunobiológicos.