EL CAMBIO DE UN UNICO AMINOACIDO EN EL DOMINIO III DE LA PROTEINA L DEL VIRUS TACARIBE AFECTA LA INTERACCIÓN CON LA PROTEÍNA Z.

WILDA, MAXIMILIANO; LOPEZ, NORA; CASABONA, JUAN CRUZ; FRANZE FERNANDEZ, MARIA TERESA

Ciudad Autonoma de Buenos Aires, Argentina

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

El virus Tacaribe (VTac) es el prototipo de los arenavirus del Nuevo Mundo. El genoma del VTac codifica cuatro proteínas: la nucleoproteína (N), la proteína precursora de las glicoproteínas de envoltura, la ARN polimerasa (L) y una pequeña proteína RING finger (Z). Usando un sistema de genética reversa anteriormente demostramos que las proteínas L y N son suficientes para llevar a cabo la transcripción y la replicación de los ARNs virales y que Z es un inhibidor de estos procesos. Presentamos, además, la primera evidencia para la familia de los arenavirus de una interacción entre Z y L y mostramos que la actividad inhibitoria de Z depende de su habilidad para interactuar con L. La proteína L del VTac tiene 2210 aminoácidos (aa). La comparación de la secuencia de aa de esta proteína con las de ARN polimerasas ARN dependientes de virus de cadena negativa revela aminoácidos conservados agrupados en dominios a lo largo de la proteína y unidos por regiones variables. Uno de estos dominios, el dominio III, exhibe cinco motivos de secuencia conservados en todas las ARN polimerasas (motivos PreA, A, B, C y D). Recientemente iniciamos el mapeo en la proteína L de los sitios de interacción con Z, encontrando que la región C-terminal no está involucrada en la interacción, e identificando una región en el extremo N-terminal, entre los aa 176 y 292, que es esencial para la unión con Z. En este estudio presentamos evidencia de que el dominio III de L se encuentra involucrado en la interacción con Z. Para esto llevamos a cabo mutaciones puntuales en los motivos de secuencia A y C de la región III de L y estudiamos la capacidad de las mutantes para interactuar con Z por medio de ensayos de coinmunoprecipitación. Dentro del motivo A mutamos el aspartato en la posición 1188 (D1188), estrictamente conservado en todas las polimerasas, y también la histidina en la posición 1189 (H1189), conservada en las proteínas L de los arenavirus. De las tres substituciones efectuadas en D1188, sólo el cambio por G afectó severamente la interacción con Z, mientras que los cambios por Q o por A fueron tolerados. Por el contrario cada una de las cinco substituciones realizadas en H1189 (por G, T, A, K o R) redujeron drásticamente los niveles de interacción. Dentro del motivo C, substituimos por A cada uno de los aa de la secuencia SDD (residuos 1328, 1329 y 1330) conservada en las ARN polimerasas de los virus de cadena negativa segmentados. El cambio de D1329 por A suprimió la interacción con Z mientras que las mutantes de L con cambios en S1328 o en D1330 por A presentaron niveles de unión a Z similares a los de L salvaje.