MAPEO DE LOS RESIDUOS INVOLUCRADOS EN LA INTERACCIÓN CON LA ARN POLIMERASA L, DENTRO DE LA REGIÓN DEFINIDA ENTRE LOS AMINOÁCIDOS G36 Y R85 DE LA PROTEÍNA Z DEL VIRUS TACARIBE

LOUREIRO, MARIA EUGENIA; WILDA, MAXIMILIANO; LOPEZ, NORA MABEL

Ciudad Autonoma de Buenos Aires, Argentina

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

Sociedad Argentina de Virologia

El virus Tacaribe (VTac), prototipo de los arenavirus del Nuevo Mundo, comprende un único grupo filogenético junto con los virus patógenos sudamericanos productores de fiebres hemorrágicas. El genoma de VTac codifica para cuatro proteínas: el precursor de las glicoproteínas (GPC), la proteína de la nucleocápside N, la proteína L y una pequeña proteína Z (95 aa). En esta última proteína se identifican tres regiones: la región N-terminal (residuos 1 a 39), un motivo RING-finger (aa 40 a 76) y una región C-terminal con 19 aa (residuos 77 a 95). Utilizando un sistema de genética reversa que reconstruye la transcripción y la replicación del ARN, basado en el suministro de los ARN y proteínas de VTac por medio de plásmidos recombinantes, hemos demostrado que las proteínas N y L son suficientes para que se lleve a cabo la transcripción y replicación de los ARN genómico y antigenómico, para una correcta iniciación de ambos procesos y para una correcta terminación de la transcripción de los ARNm (J. Virol. (2001) 75:12241-12251; Virus Res. (2007) 124: 237–244). Usando ese sistema, además, demostramos que tanto la proteína Z en su forma salvaje como la proteína de fusión de Z con la glutatión-S-transferasa (gst) (gstZ), inhiben la transcripción y replicación por interacción directa con la ARN polimerasa L. Más aún, encontramos que la región comprendida entre los residuos G36 y L95 de Z, es esencial para la interacción con L (J. Virol. 77, 10383-10393 (2003). Estudios posteriores utilizando un péptido de 49 aa, que comprende los residuos G36 a R85, fusionado a gst (gstZ36-85), demostraron que éste conserva la misma capacidad que la Z salvaje para interactuar con L e inhibir su actividad. En este trabajo, hemos comenzado la identificación dentro de la región G36-R85 de los aa involucrados en la interacción con L y en la capacidad de Z de inhibir la actividad de la polimerasa viral. Para esto se introdujeron mutaciones dentro de esta región tanto en gstZ como en gstZ36-85, dirigidas a aa conservados en todos los arenavirus. Dentro del dominio RING los residuos W44, L50 e Y57 fueron sustituidos por A. Por otro lado, para definir la participación de los residuos adyacentes al dominio RING, se generaron mutantes puntuales de los residuos G36, R37, Y38 y N39 en el extremo N-terminal y se construyó una mutante con una deleción de 4 aa en el extremo C-terminal, que expresa el péptido que comprende los aa G36 a P81. La interacción entre gstZ, gstZ36-85 o las diferentes mutantes y L se estudió mediante ensayos de coinmunoprecipitación con sueros específicos contra L y gst. Se analizó también la capacidad relativa de las mutantes de inhibir la actividad de la polimerasa en el contexto del sistema de genética reversa.