IDENTIFICACIÓN DE LAS REGIONES INVOLUCRADAS EN LA INTERACCION ENTRE LA ARN POLIMERASA (PROTEÍNA L) Y LA PROTEINA RING FINGER Z DEL VIRUS TACARIBE

WILDA, MAAXIMILIANO; LOPEZ, NORA Y FRANZE, MARIA TERESA

Buenos Aires, Argentina

Congreso; VIII Congreso Argentino de Virología; 2005

Sociedad Argentina de Virología - Asociación Argentina de Microbiología

El virus Tacaribe (VT), prototipo de los arenavirus del Nuevo Mundo, comprende un único grupo filogenético junto con cuatro virus patógenos sudamericanos productores de fiebres hemorrágicas. El genoma de VT codifica para cuatro proteínas, el precursor (GPC) de las glicoproteínas, la proteína de la nucleocápside (N), la ARN polimerasa (proteína L) y una pequeña proteína llamada Z, con un motivo “RING finger”. La proteína L contiene 2210 aminoácidos (aa) y en su secuencia se pueden identificar las 4 regiones descriptas en las ARN polimerasas de virus de ARN de cadena negativa segmentados. En un sistema reconstituido con proteínas y ARNs virales recombinantes (sistema de genética reversa) nuestro grupo demostró que Z es inhibidora de la replicación y transcripción viral a través de su interacción directa con la proteína L. En el presente trabajo se mapearon los dominios de L comprometidos en la interacción con Z. Para esto se construyeron plásmidos que expresan  mutantes de deleción de la proteína L. Estas mutantes fueron expresadas junto con Z, esta última como proteína de fusión con glutatión-S-transferasa (gst), en células CV1. Las interacciones entre las proteínas se estudiaron por coinmunoprecipitación con sueros específicos contra gst y contra L. Las mutantes con deleciones en el extremo carboxiterminal (C-terminal) de L indicaron que la región comprendida entre los aa 1666 y 2210 no se requieren para la interacción con Z. Sin embargo la eliminación  de los aa comprendidos entre las posiciones 1444 y 1666  disminuye drásticamente la interacción con Z, siendo la interacción Z-L suprimida cuando se eliminan los aa comprendidos entre  las posiciones 1270-1444. Por otra parte las mutantes con deleciones en el extremo aminoterminal (N-terminal) de L indicaron que  la región comprendida entre los aa 156-292 es necesaria para la interacción con Z. También se determinaron las regiones de Z involucradas en la interacción con L. Para esto se construyeron mutantes de Z que fueron expresadas como proteínas de fusión con gst. Se demostró por coinmunoprecipitación que los aa 36 a 39 y 77 a 85 de Z, adyacentes respectivamente, a las regiones N-terminal y C-terminal del domino RING finger, son necesarios para la interacción con L. Por otra parte, utilizando el sistema de genética reversa se encontró que estos aa también son necesarios para la actividad inhibitoria de Z.