La proteína Z del virus Tacaribe interactúa con la proteína L, componente de la polimerasa viral.

,R., LOPEZ, N., WILDA, M. Y FRANZE-FERNÁNDEZ, M. T.

Buenos Aires. Argentina.

Congreso; VII Congreso Argentino de Virología; 2002

Sociedad Argentina de Virología - Asociacion Argentina de Microbiología

El virus Tacaribe (VT), prototipo de los arenavirus del Nuevo Mundo, comprende un único grupo filogenético junto con cuatro virus patógenos sudamericanos productores de fiebres hemorrágicas. El genoma de VT codifica para cuatro proteínas, el precursor de la glicoproteína (GPC), la proteína de la nucleocápside N, la proteína L y una pequeña proteína Z con un motivo “RING finger”. Hemos establecido recientemente un sistema que reconstruye la transcripción y la replicación del ARN, basado en el suministro de los ARN y proteínas de VT por medio de plásmidos recombinantes. Usando este sistema hemos demostrado que las proteínas N y L son suficientes para que se lleve a cabo la transcripción y replicación de los ARN genómico y antigenómico y que la proteína Z es un inhibidor de estos procesos ( J. Virol. (2001) 75:12241-12251). Para elucidar el mecanismo por el cual Z interfiere en la síntesis del ARN viral nos cuestionamos si ésta interactúa con alguno de los componentes proteicos de la polimerasa viral (N, L). En células transfectadas con varias combinaciones de plásmidos que expresan L, N y Z o la proteína de fusión con glutation-S-transferasa (gst), llamada gst-Z; se encontró que tanto Z como gst-Z interactúan con L pero no con N (a concentraciones en las cuales Z o gst-Z inhiben la transcripción/replicación). Inversamente, la proteína de fusión gst-N no interactuó con Z en las condiciones ensayadas. La interacción Z (gst-Z)/L se mantuvo en ausencia de la expresión de N. Del mismo modo, N (gst-N) interactuó con L en ausencia de la expresión de Z. Cuando se coexpresaron L, N y gst-Z, N se unió a glutathion-sepharose, a través de su interacción con L, y coinmunoprecipitó con suero contra gst. Considerando que la unión de gst-Z a L no disoció el complejo N/L, los sitios de unión de Z y N aparentan ser diferentes. Los dominios de la proteína Z que promueven la unión con L se identificaron usando deleciones de Z fusionadas a gst. La deleción del dominio hidrofóbico aminoterminal (aminoácidos 1 a 34) no disminuyó significativamente la unión con L; por el contrario se observó una importante disminución de dicha unión cuando la deleción  involucraba el extremo carboxiterminal (aminoacidos 79 a 95). La destrucción del motivo RING finger (comprendida entre los aminoácidos 40 a 76) eliminó completamente la interacción Z/L.