Nuevo método para la determinación de perfiles elementales por ICP-MS en fracciones proteicas obtenidas mediante native-PAGE de líquido sinovial con artritis reumatoidea

MOYANO, MARIO F; MARIÑO REPIZO, LEONARDO; ACOSTA, MARIANO; GIL, RAUL A; MARTÍNEZ, LUIS D

SAN LUIS

Congreso; II Congreso Argentino de Espetrometria de Masas; 2014

SOCIEDAD ARGENTINA DE ESPECTROMETRIA DE MASAS

Los oligoelementos actúan como cofactores enzimaticos en el organismo y, a pesar de que se encuentran a nivel de trazas, la deficiencia de estos se vincula con ciertas patologias1. En los últimos años algunos estudios han desestimado el rol de los oligoelementos en la etiología y patogénesis de la artritis reumatoide (AR), sosteniendo que las alteraciones en las concentraciones de elementos en el líquido sinovial (LS) de pacientes son inconsistentes1. Por tales motivos, la identificación y detección de metaloenzimas (ej: ceruloplasmina) presenta un marcado interés en la actualidad2. La determinación elemental de trazas en fluidos corporales es un protocolo ampliamente utilizado. Espectrometría de absorción atómica (AAS) es la principal técnica analítica utilizada. Sin embargo, actualmente la medición mediante plasma acoplado inductivamente con detección de masas (ICP-MS) se destaca por sus numerosas ventajas1,3. El objetivo del presente trabajo fue desarrollar un método preciso, sensible y robusto para la determinación de perfiles elementales por ICP-MS en fracciones proteicas de líquido sinovial humano separadas por electroforesis. Se utilizó la separación de proteínas por electroforesis en gel de poliacrilamida no desnaturalizante Native-Page (N-Page). Las fracciones obtenidas fueron disueltas, diluidas y posteriormente analizadas por ICP-MS. Así, N-Page permitió la separación de proteínas sin la disociación de los elementos unidos a fracciones2. Con el uso combinado de ambas técnicas(N-Page/ICP-MS), se logro definir perfiles elementales y su distribución bioquímica en LS. El procedimiento de análisis elemental fue efectivo, basado en evitar la inestabilidad del plasma y minimizar los inconvenientes del instrumental de ICP-MS. La exactitud del método propuesto fue verificada analizando muestras enriquecidas, así como también, comparando los resultados con muestras tratadas en forma convencional mediante digestión ácida con microondas. Los resultados obtenidos para los elementos bajo estudio evidenciaron niveles de concentración entre 158.22 μg L-1 (Co) hasta 32418.23 μg L-1 (Zn) presentes en la fracción proteica de menor PM (Peso molecular). El método desarrollado cuenta con la elevada sensibilidad propia del análisis por ICP-MS y las ventajas de la separación electroforética en gel de poliacrilamida no desnaturalizante (N-PAGE): mínimo volumen de muestra, bajo costo, mínimo mantenimiento, alto rendimiento, y eficiente separación. La información obtenida es potencialmente importante para dilucidar el rol que los oligoelementos tienen en la fisiopatología de la enfermedad.