2x1: Diseño e implementación de una estrategia de PCR dúplex para diagnóstico de COVID-19

PEREZ DIAZ M; PEREZ DIAZ JP; ROSALES E; LACAZE A; BURATTI C; DISTEL M; CABRAL F; PEÑALVA J; JOFRÉ F; MANZUR MARÍA JIMENA; JURI AYUB MAXIMILIANO

ISSN: 2684-0227 - e-ISSN: 2684-0227 - UNSL 2.0 Innovación tecnológica y Social

Secretaría de Vinculación Tecnológica

Año: 2020 vol. 1 p. 32 - 33

2x1: Diseño e implementación de una estrategia de PCR dúplex para diagnóstico de COVID-19La pandemia COVID-19 surgió hace apenas cinco meses, generando una emergencia sanitaria a escala global. En un brevísimo período de tiempo, nuestro estilo de vida contemporáneo (caracterizado por un enorme flujo de personas, bienes y servicios) ha sufrido un impacto sin precedentes. Por otro lado, nunca en la historia de la humanidad se pudo acumular tanto conocimiento científico en tan poco tiempo sobre un tema en particular.El diagnóstico molecular de infección con SARS-Cov-2 mediante la detección del genoma viral por la técnica de PCR (reacción en cadena de la polimerasa, por sus siglas en inglés) es la principal herramienta para confirmar la infección. Dicho diagnóstico permite detectar y aislar a quienes puedan transmitir la enfermedad. Esto, en el marco de políticas sanitarias integrales y el acatamiento social a las normas de distanciamiento, contribuye a evitar, suprimir o limitar la dispersión de la enfermedad.El protocolo estándar de detección de SARS-Cov-2 en muestras de pacientes (usualmente hisopados oro y/o nasofaríngeos) consiste en dos reacciones de PCR que identifican por un lado material genético humano, y por otro fragmentos del genoma viral. La primera reacción es imprescindible para garantizar la integridad y calidad de la muestra analizada y evitar falsos negativos. En otras palabras, evita que problemas de toma, transporte, almacenamiento o procesamiento de la muestra que conducen a la no detección del genoma viral sean interpretados erróneamente como ausencia de infección. La presencia de material genético humano y viral son detectados mediante fluorescencia con sondas específicas que emiten luz en la región del espectro correspondiente al color verde (520 nm). Por lo tanto, cada muestra debe ser analizada en dos tubos de reacción separados; uno para detectar material genético humano (reacción control), y el segundo para detectar genoma viral (reacción diagnóstica).esquemas fueron cedidos por el Dr. Adolfo Zurita (https://www.youtube.com/channel/UCY4cKKeewzLB4f5pQVzvZ3g/about).En el marco de una colaboración entre la Universidad Nacional de San Luis y el Ministerio de Salud Provincial, miembros del Laboratorio de Salud Pública Provincial ?Dalmiro Pérez Laborda? y docentes del Área de Biología Molecular de la Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia de la Universidad, se propuso adaptar el diagnóstico en uso a la metodología de PCR dúplex. En la misma, dos reacciones de detección son llevadas a cabo en el mismo tubo de reacción, disminuyendo a la mitad los gastos de diversos insumos, así como el tiempo y la complejidad del proceso. Para ello, se diseñó y puso en práctica una estrategia en la cual el sistema de detección que evidencia la presencia de material genético humano se reemplazó por una alternativa cuya fluorescencia emite luz en la zona roja del espectro visible (668 nm). De esta manera, y luego de optimizar las condiciones de reacción y detección, en un mismo tubo de reacción se detecta simultáneamente el material genético humano y viral, sin que una de las reacciones interfiera con la otra y sin afectar la sensibilidad de la técnica. La metodología de PCR dúplex ha sido validada y ya se encuentra en funcionamiento en el Laboratorio de Salud Pública.