Inducción de la fosforilación en Ser de STAT1 por un péptido cíclico antitumoral del interferón-alfa2b: rol de p38 MAPK y PKC delta

BLANK VC; JATIB M; PEÑA C; ROGUIN, L. P

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica, , Reunión Científica Anual 2010 de la Sociedad Argentina de Fisiología, XLII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental; 2010

SAIC, SAFIS, SAFE

En la búsqueda de péptidos miméticos del interferón-alfa2b (IFN-a2b), en nuestro laboratorio sintetizamos un péptido quimérico cíclico (PQC) con actividad antiproliferativa y apoptótica. Dicho péptido activa las quinasas Jak1 y Tyk2, que fosforilan proteínas STAT en residuos de Tyr, y estimula la p38 MAPK. Puesto que ha sido sugerido que p38 y/o la serina  quinasa PKC delta podrían ser responsables de la fosforilación en Ser de STAT1 inducida por el IFN-a2b, el propósito del presente trabajo fue: a) investigar si PQC fosforila residuos de Ser de STAT1, b) determinar cuáles son las serina quinasas involucradas en este proceso. Para ello, luego de incubar células WISH (amnios humano) durante distintos tiempos en presencia del péptido, medimos la fosforilación en Ser de STAT1 por ensayos de Western Blot. Los resultados mostraron un aumento en los niveles de fosfo-Ser-STAT1 a los 60 min de incubación (2.1 ± 0.3). Con el fin de evaluar si p38 está relacionada con esta activación, las células se preincubaron con SB203580, un inhibidor específico de p38. En estas condiciones, la fosforilación en Ser de STAT1 se bloqueó completamente. Por otro lado, también comprobamos que PQC aumentó significativamente los niveles de fosforilación de PKC delta a partir de los 30 minutos de incubación (2.4± 0.3). Teniendo en cuenta que se ha descripto que, según el tipo celular, PKC delta podría regular la activación de p38, determinamos si PQC induce la fosforilación de p38 luego de preincubar las células con rotlerina, un inhibidor farmacológico de PKC delta. Observamos que la activación de p38 disminuyó de 1.93 ± 0.45 a 0.95 ± 0.25 luego de 30 minutos de estímulo. En su conjunto, los resultados obtenidos indican que p38 participa en la fosforilación en Ser de STAT1 inducida por el péptido, y sugieren que PKC delta estaría involucrada en la cascada de activación de p38.