Estudio fenotípico y genotípico de una bacteria con actividad antimicrobiana aislada en el lago Cruz de Piedra (San Luis)

JS DISTEL; ME, COZZOLINO; WALTER J. LAPADULA; ZÁRATE JM; JURI AYUB M; PG, SILVA; HJ, SILVA

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología. II Congreso de microbiología agrícola y ambiental; 2013

Introducción. El hallazgo de microorganismos autóctonos con actividad antimicrobiana constituye un importante recurso de investigación en la búsqueda de nuevos antibióticos para uso clínico. Entre los aspectos más frecuentemente estudiados se encuentran la caracterización taxonómica del aislado, el análisis del espectro de acción, el efecto de las condiciones ambientales y nutricionales de cultivo con la purificación y caracterización química de los metabolitos producidos. Objetivos.Caracterizar fenotípica y genotípicamente una bacteria con actividad antimicrobiana aislada localmente. Materiales y métodos. El aislado fue sometido a estudios morfológicos, de crecimiento, bioquímicos y susceptibilidad a antibióticos, totalizando 92 pruebas, las cuales fueron analizadas mediante sistemas informáticos (API web?, PIBWin 2.0 y NTSYSpc 2.0). El análisis filogenético se realizó a partir del gen 16S ARNr, amplificado por PCR, clonado en el vector pGEM®-T Easy y secuenciado. La secuencia se comparó con datos disponibles en el GenBank mediante BLASTN. Los estudios filogenéticos del microorganismo se desarrollaron a partir de los métodos de Distancia: Neighbor-Joining (NJ) y Máxima verosimilitud (MV). El espectro de actividad antimicrobiana se determinó mediante la técnica ?well diffusion? en el sobrenadante libre de células y esporas (SLCE) de cultivos líquidos de la bacteria productora, utilizando como microorganismos indicadores a bacterias gram-positivas (Bacillus cereus, Enterococcus faecalis, Listeria innocua, Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus (MRSA)); gram-negativas (Escherichia coli, Escherichia coli O157:H7, Pseudomonas aeruginosa, Yersinia enterocolitica) y levaduras (Candida albicans, Rhodotorula sp., Saccharomyces cereviseae). Resultados. El aislado fue un bacilo móvil, gram-positivo, esporulado, aerobio estricto, de 3-4 µm de longitud con un diámetro menor a 1 µm. Según el sistema API, incluyendo el metabolismo de carbohidratos y pruebas complementarias, se postularon tres posibles especies: Bacillus liqueniformis (43%), B. amyloliquefaciens (35%) y B. subtilis (21%). El programa PIBWin, utilizando 25 pruebas morfológicas y fisiológicas, lo designó como: B. amyloliquefaciens con un valor de identificación de 0.98. Finalmente, el dendograma generado a partir de 65 pruebas lo agrupó como B. velezensis (sinónimo heterólogo de B. amyloliquefaciens) con niveles de similitud del 95.5 %. El árbol filogenético obtenido del análisis del gen 16S RNAr ubicó al aislado junto a cepas de B. amyloliquefaciens, con valores de ?bootstraps? del 83% y 81% para los árboles de MV y NJ respectivamente. El SLCE presentó actividad antagónica contra todos los microorganismos ensayados, con excepción de Rhodotorula sp. y P. aeruginosa. Conclusiones. De acuerdo a los resultados obtenidos la bacteria aislada se identificó como B. amyloliquefaciens, con un espectro de actividad antibacteriana y antifúngica de potencial uso clínico y en alimentos.