Detección de la habilidad hidrolítica/oxidativa en hongos comestibles/medicinales de Misiones.

BARUA, RAMONA CELESTE; CONIGLIO, ROMINA; FONSECA, MARIA ISABEL

Simposio; 6º Simposio Argentino de Procesos Biotecnológicos: transfiriendo biotecnología para el desarrollo.; 2021

El uso de enzimas hidrolíticas y oxidativas es muy amplio, y particularmente en la industria alimentaria, se las utiliza para mejorar el rendimiento de los productos y la calidad. En este sentido, el objetivo de este trabajo fue determinar cualitativamente la capacidad hidrolítica y oxidativa de hongos comestibles y medicinales silvestres, provenientes de la selva paranaense.Para ello se utilizaron 11 hongos comestibles/medicinales identificados como Pleurotus sajor-cajú (LBM105), Pleurotus sp. (LBM266), Trametes sp. (LBM267), Oudemansiella sp. (LBM268), Auricularia fuscosuccinea (LBM242; LBM243; LBM244; LBM245, LBM246) y Schizophyllum sp. (LBM223, LBM026). Los hongos se activaron en medio MEA (agar 15 g/L y malta de extracto 12,7 g/L) e incubaron a 28°C por 7 días, luego se cortaron asépticamente tacos de agar cubiertos de micelio joven (5mm2) que se colocaron en diferentes medios de cultivo sólidos. La actividad endoglucanasa se evaluó en medio agar-Czapek (NaNO3 2 g/l, KH2PO4 1 g/l, KCl 0,5 g/l, MgSO4 7H2O 0,5 g/l, FeSO4.7H2O 0,01 g/l, agar 20 g/l) suplementado con carboximetilcelulosa 1g/L y extracto de levadura 0,1% p/v a pH 4,5. Para la detección de la actividad endoxilanasa, las cepas crecieron en placas con agar-Czapek con xilano 1% p/v y extracto de levadura 0,25 g/L a pH 4,5. En ambos casos, las placas se tiñeron con Rojo Congo 0,1% p/v y se midió el diámetro de crecimiento y halos de decoloración en las placas. Se calculó el índice de eficiencia celulolítica (IEC) mediante la ecuación: IEC=hd⁄dc, donde: hc=halo de degradación y dc=diámetro de la colonia. La actividad β-glucosidasa se evaluó en placas con medio agar (15 g/L) suplementado con 4-metilumbeliferil glucósido 0,1 mM, carboximetilcelulosa 0,1% p/v y extracto de levadura 0,1% p/v a pH 4,5 y se reveló bajo luz U.V. La detección de las actividades endoglucanasa, β-glucosidasa y endoxilanasa se realizó sobre las placas inoculadas e incubadas a 28°C durante 7 días o hasta que el micelio alcanzara un diámetro ≥ 60 mm. Para evaluar la actividad lacasa se utilizaron MEA y MEA adicionado con CuSO4 0,5 mM. Estas se incubaron durante 7 días o hasta que el diámetro de crecimiento de la colonia alcanzara los bordes de la placa. Luego se tiñeron con 2,6 dimetoxifenol 1 g/L en buffer acetato de sodio 0,1 M pH 3,6.Todas las cepas presentaron actividad endoglucanasa positiva, siendo LBM105, LBM223 y LBM026 las que presentaron mayor IEC (˃1,4 mm). Asimismo, todas las cepas evidenciaron actividad β-glucosidasa. En cuanto a la actividad endoxilanasa, las cepas LBM242, LBM 246, LBM223, LBM026 y LBM268 mostraronlos valores de halos de hidrólisis más altos (˃10 mm). Todas las cepas evidenciaron actividad lacasa de manera constitutiva siendo que para LBM242, LBM244, LBM245 y LBM246 la actividad se vio incrementada por la presencia de CuSO4. Las cepas LBM223 y LBM026 mostraron baja actividad. Todas las cepas ensayadas poseen la capacidad de producir enzimas hidrolíticas y oxidativas, sin embargo, para seleccionar las más promisorias para utililizar en procesos biotecnológicos, se debe complementar con ensayos que permitan cuantificar la producción enzimática.