Diseño de cebadores degenerados para la amplificación del gen endoglucanasa del hongo de pudrición blanca peniophora sp.

GIORGIO, ERNESTO M.; CONIGLIO, ROMINA O.; MORALES, ANDREA L.; VILLALBA, LAURA L.; ZAPATA, PEDRO D.

Corrientes

Congreso; XL Congreso Argentino de Genética, III Simposio Latinoaméricano de Citogenética y Evolución, I Jornadas SAG-NEA; 2011

El hongo de pudrición blanca Peniophora sp. es un microorganismo de interés biotecnológico por su capacidad de producir y secretar al medio un espectro de enzimas degradativas, tanto hidrolíticas como oxidativas. Entre las enzimas hidrolíticas se encuentran aquellas responsables de la biodegradación de celulosa. Estas enzimas actúan sinérgicamente sobre el sustrato lignocelulósicoy se las clasifica principalmente en tres tipos: endoglucanasas, celobiohidrolasas y β-glucosidasas. Estamos interesados en el estudio bioquímicoy molecular de la actividad celulolítica de este hongo y el objetivo particular de este trabajo fue diseñar cebadores degenerados que amplifiquen un fragmento del gen de endoglucanasas de la familia GH5. Con las secuencias aminoacídicas devarios hongos basidiomicetes obtenidas de la base de datos GenBank, se realizó un alineamiento de secuencias múltiples con ayuda del programa t-coffee y se examinaron las secuencias en busca de regiones conservadas que pudieran servir para el diseño de los cebadores. Se diseñaron dos pares de cebadores, dos sentidos ubicados en el dominio de unión a la celulosa y dos antisentidos ubicados en el dominio catalítico de las endoglucanasas. Se ha logrado amplificar fragmentos genómicos de 100, 800 y 900 pb, cuyos amplicones fueron recortados, purificados, reamplificados y secuenciados. La secuencia nucleotídica de 900 pb tubo una elevada identidad con secuencias de endoglucanasas pertenecientes a la familia GH5 de otros basidiomicetes. Queda aún por investigar las regiones 5´ y 3´ fl anqueantes a este amplicón para obtener la secuencia completa del gen.