Estudios preliminares de la pérdida de plásmidos en Lactobacillus hilgardii por efecto de la temperatura

CHALFOUN NADIA REGINA; SAGUIR FABIANA; MANCA DE NADRA MARÍA CRISTINA

San Miguel de Tucumán- Tucumán

Jornada; Jornadas Científicas y Encuentro de Jóvenes Investigadores Augusto Palavecino; 2002

Universidad Nacional de Tucumán (UNT)

La cepa de Lactobacillus hilgardii 5w aislada de vino argentino produce histamina a partir de histidina, una amina biógena tóxica para el hombre y cuyo  fenotipo ha sido relacionado con la presencia de plásmidos.  En un trabajo previo con 8 cepas de bacterias lácticas, demostramos en Lactobacillus hilgardii 5w, la existencia de plásmidos. Considerando que el curado de plásmidos crípticos permite investigar caracteres codificados por el material extracromosomal, el objetivo de este estudio preliminar es determinar  el efecto de la temperatura como agente físico de curado en Lactobacillus hilgardii 5w cultivado en medio MRS pH 5,5 privado de agentes tamponantes. Para los experimentos de curado Lactobacillus hilgardii 5w se incuba en:  - MRS privado de citrato de amonio y - MRS privado de citrato de amonio y fosfato monopotásico a temperatura no óptima, 37ºC y se realizan 10 repiques sucesivos cada 48 horas. 5 Colonias individuales obtenidas a partir de cada una de las condiciones ensayadas se seleccionan al azar para analizar los perfiles plasmídicos. Los pellets celulares se almacenan a menos 20ºC y la extracción de DNA plasmídico se realiza utilizando el protocolo de Birnboim y Doly (1) puesto a  punto y optimizado para bacterias Gram (+) en nuestro laboratorio. Después  del curado se determinan los  perfiles de plásmidos: no se observan bandas correspondientes al DNA plasmídico en dos de los nueve aislados analizados, lo que representa un  22% de colonias curadas. Una de ellas proviene del cultivo crecido en  ausencia de citrato y la otra del cultivo crecido en  ausencia de citrato más fosfato. Podemos sugerir que el empleo de temperatura no óptima como agente físico de  curado de plásmidos permitió la obtención de dos derivados  curados de Lactobacillus hilgardii 5w,  independientemente de la ausencia de citrato o citrato y fosfato del medio MRS. 1- Sambrook, J., Fritsch E.F. And Maniatis T. 1989. Molecular cloning: a laboratory manual 2 ed. Cold spring Harbor Laboratory press, Cold Spring Harbor, N.Y.