Cuantificación de Proteínas en Etanol por Espectroscopía UV-Vis

CARLA JOSÉ; LAURA E. BRIAND

Lanús, Buenos Aires

Congreso; XXVIII Congreso Argentino de Química; 2010

Asociación Química Argentina

La cuantificación de proteínas en solución -en forma exacta, precisa y reproducible- es probablemente uno de los problemas experimentales más frecuentes que enfrenta el investigador. Existe una amplia gama de métodos para estimar la concentración proteica de una muestra debido al desarrollo de la proteómica en los últimos años, pero pocos de ellos se encuentran disponibles. El principio de los métodos químicos empleados para la determinación de la concentración proteica es establecer una relación entre la cantidad de un producto (usualmente un cromóforo o un fluoróforo) formado por la reacción o interacción entre un reactivo y una función química proteica. El método de referencia para determinar químicamente la concentración proteica es la reacción de ninhidrina. Dentro de las alternativas a la reacción de la ninhidrina se encuentran los métodos de Lowry y del ácido bicinconínico y métodos basados en la interacción de las proteínas con colorantes (método de Bradford y de colorantes aniónicos). Así mismo, los métodos gravimétricos se basan en la determinación directa de la masa de proteínas deshidratadas y en la preparación de soluciones valoradas mediante pesada del componente proteico. El método espectroscópico basado en la espectroscopia de absorción UV ha probado ser sensible, muy versátil, con un error aceptable y susceptible de ser usado en un laboratorio medianamente especializado permite obtener valores con una exactitud del 10 % o mejor y una precisión del 1-2. En este contexto, y teniendo en cuenta que nuestro interés es la cuantificación de proteína desorbida desde un biocatalizador en medio orgánico (etanol), lo cual agrega una complicación dado que los métodos mencionados anteriormente se basan en aplicaciones en sistemas acuosos, decidimos emplear la absorción UV-Visible para nuestros estudios.