EVALUACIÓN DE LA SEGURIDAD DE LA BACTERIA PROBIOTICA DE NUEVA GENERACIÓN Corynebacterium pseudodiphteriticum MEDIANTE ESTUDIOS FUNCIONALES Y GENOMICOS

LEONARDO ALBARRACÍN; RODRIGUEZ CECILIA; MELNIKOV VYACHESLAV; VILLENA JULIO

Jornada; II Jornadas de Microbiología sobre Temáticas Específicas del NOA: Resistencia bacteriana; 2018

Asociación Argentina de Microbiología - Filial NOA

Corynebacterium pseudodiphtheriticum es una bacteria Gram positiva, no fermentativa, ureasa ynitrato positiva con forma variable (varillas y cocos), que se encuentra como miembro de lamicrobiota normal del tracto respiratorio superior humano. Se ha sugerido que esta especiebacteriana puede ser usada como probiótico de nueva generación para incrementar la resistenciaa infecciones respiratorias. En este sentido, en trabajos anteriores demostramos que C.pseudodiphtheriticum 090104 es capaz de potenciar la respuesta inmune contra Streptococcuspneumoniae y Virus Sincicial Respiratorio en modelos animales. Dado que se han descriptocasos de infecciones oportunistas producidas por cepas de C. pseudodiphtheriticum en pacientesinmunocomprometidos, son necesarios estudios de seguridad antes de su aplicación enhumanos. En este trabajo, mediante estudios in vitro, in vivo e in silico se evaluó la presencia yla expresión de genes de resistencia a antibióticos y de factores de virulencia en la cepa 090104,con el objetivo de demostrar su inocuidad y avanzar con su empleo como probiótico de nuevageneración. Para evaluar la susceptibilidad a los antimicrobianos se siguió el método demicrodilución en caldo recomendado por el CLSI para bacterias poco frecuentes o fastidiosas(M45-A, CLSI-2006). Los agentes antimicrobianos evaluados fueron penicilina (PEN),cefotaxima (CTX), ceftriaxona (CRO), meropenem (MER), vancomicina (VAN), gentamicina(GEN), ciprofloxacina (CIP), eritromicina (ERY), y tetraciclina (TET). Los resultados MIC seinterpretaron siguiendo las pautas CLSI-2006. La evaluación de la translocación bacteriana enratones infantes se evaluó determinando la presencia de C. pseudodiphtheriticum en muestras depulmón, sangre y bazo. Se analizó además el genoma de la cepa 090104 (GenBank accesoAVFF00000000) para detectar la presencia de genes de resistencia a antibióticos transmisibles yde factores de virulencia. C. pseudodiphtheriticum 090104 presentó resistencia a los antibióticos􀉴-lactámicos testeados (PEN, CTX, CRO) y a macrólidos como ERY. Ellas constituyen lasresistencias adquiridas más prevalentes descriptas en esta especie. El análisis del genoma noevidenció la presencia de genes de resistencia a antibióticos adquiridos por transferenciahorizontal genética. El análisis genómico reveló la presencia de una proteína tipo hemolisina enel genoma de C. pseudodiphtheriticum 090104 con características similares a la encontrada enBacillus cereus. Sin embargo, la bacteria respiratoria produjo una leve alfa hemolisis en placasde agar conteniendo sangre humana. Además, la cepa 090104 fue segura cuando se administrópor vía nasal (dosis 108, 109 y 1010 UFC/ratón) a ratones infantes Balb/c. No se detectó C.pseudodiphtheriticum en muestras de sangre o bazo, ni se observaron alteraciones en lahistología pulmonar. Los resultados muestran que C. pseudodiphtheriticum 090104 es segurapara su empleo en humanos.