Obtención de un conjugado especifico para la detección rápida de Vibrio parahaemolyticus por IFD

BABINI NB; REAL S; ALMEIDA C; DI GENARO M S; MICALIZZI B; SREFANNINI DE GUZMAN A M

Mendoza, Argentina

Congreso; XX Reunión Científica Anual; 2002

Sociedad de Biología de Cuyo

Vibrio parahaemolyticus  es un microorganismo marino que se encuentra en los estuarios y costas marianas cuando la temperatura del agua es superior a 15º C. es la principal causa de gastroenteritis asociada con el consumo de pescado y mariscos de agua salada. Objetivos: Obtención de un anticuerpo IgG conjugado con isotiocianato de fluoresceína(FITC) específico para V. parahaemolyticus  a fin de ser utilizado para la detección rápida de la bacteria en muestras clínicas y de alimento. Métodos: El suero hiperinmune fue obtenido por inmunización de tres conejos por vía subcutánea con una suspensión formalizada (106 microorganismos/mL) de V.parahaemolyticus  ATCC 17802. Este suero fue titulado por ELISA   y aglutinación en placa. La IgG del suero fue purificada por cromatografía de afinidad en columna de sepharosa CL-4B-proteína A y elusión con buffer Tris de 1, 0.1, 0.01 M y glicina pH 3. A partir de 1 mL de suero se obtuvieron cuatro fracciones. Por lectura de de absorbancia a 280 nm se determinó que la fracción 4 resultante de la elusión con glicina, correspondió al pico de la IgG . El anticuerpo purificado fue marcado con FITC (20 µL de 5 mg/mL en dimetilsulfóxido anhidro por cada miligramo de anticuerpo.) Luego de la eliminación por diálisis de FITC no unida al anticuerpo se calculó la concentración de proteína, relación FITC/proteína y se evalúo el conjugado obtenido por Inmunofluorescencia directa (IFD), utilizando una suspensión formalizada de 106 microorganismos/mL de V. parahaemolyticus. Resultados: El suero hiperinmune tuvo por ELISA un título 1/800 y por aglutinación en placa 1/64. El conjugado obtenido fue capaz de reaccionar específicamente con V. parahaemolyticus . Discusión: Se concluye que el conjugado obtenido posee características de marcación óptimas para la técnica de IFD y epecificidad para V. parahaemolyticus, por lo que lo consideramos adecuado para su uso en detección rápida de este microorganismo.