MUERTE DE MACROFAGOS PERITONEALES DE RATON INFECTADOS CON CLOSTRIDIUM CHAUVOEI

CÁCERES, CLAUDIA SOLEDAD; COLOCHO, FLORENCIA AMANCAY; MATTAR, MARÍA AÍDA

Buenos Aires

Congreso; Congreso Argentino de Estudiantes de Farmacia, Bioquímica y Biotecnología; 2019

Universidad de Buenos Aires

Introducción: Clostridium chauvoei es un bacilo anaeróbico, agente causante de la enfermedad de la mancha (pierna negra), que tiene un importante impacto en la industria ovina y ganadera a nivel mundial. La mancha se considera una gangrena gaseosa, enfermedad aguda con periodo de incubación de 2 a 5 días, teniendo una tasa de mortalidad cercana al 100%. El trauma inicial daña al tejido muscular y altera el suministro de sangre. Los síntomas iniciales son fiebre generalizada y dolor en el tejido infectado. Una de las características más destacadas de la mionecrosis producida por este microorganismo, es la ausencia de células fagocíticas en el sitio de la infección. Tanto la inducción de apoptosis como la necrosis son consideradas mecanismos de evasión del sistema inmune innato, ya que logran la destrucción de las células del sistema inmunológico. Objetivos: El objetivo de este trabajo fue evaluar la capacidad de Clostridium chauvoei para inducir apoptosis, necrosis y / o autofagia en macrófagos peritoneales de ratón a diferentes multiplicidades de infección (MDI): 1: 1, 10: 1, 100: 1 y en diferentes momentos correspondientes a 4, 10 y 24 horas. Metodología: Se utilizaron células de Clostriudium chauvoei ATCC 10092, obtenidas en fase logarítmica de cultivo. Las células fagocíticas de ratón se cultivaron en medio DMEM suplementado con suero de ternera fetal al 10%, y se incubaron en una atmósfera enriquecida con CO2 al 5% a 37 ° C. La presencia de apoptosis, necrosis y / o autofagia se determinó mediante pruebas preliminares mediante cambios morfológicos observados por microscopía óptica con el uso de la técnica de tinción de Giemsa. Resultados: Las diferencias en los tipos de muerte celular analizados (apoptosis, necrosis y autofagia), fueron evidenciables a las 24 horas post infección para todas las MDI ensayadas. La apoptosis fue significativamente mayor a las MDI 1:1 y 10:1 con respecto al MDI 100:1. La necrosis fue evidentemente significativa cuando fue empleada una MDI 100:1, con presencia de formas bacilares correspondientes a la infección por Clostridium chauvoei. La autofagia fue significativamente mayor a las MDI 1:1 y 10:1 con respecto al MDI 100:1, siendo ausente en esta última dosis infectiva. Conclusiones: Por lo tanto, la apoptosis del macrófago se llevó a cabo a bajas dosis infectivas, sin embargo, a altas dosis el efecto de muerte fue conducido a la necrosis. Estos hechos estarían coincidiendo con la bibliografía, en donde la ausencia de células fagocíticas en animales infectados con Clostridium chauvoei es característica. Cabe destacar que la presencia de autofagia a bajas MDI, estaría asociada a la protección del macrófago al estrés por la infección, en cambio, a MDI elevada, donde el estrés es excesivo, la autofagia es conducida a un mecanismo de muerte celular, la necrosis. Este trabajo es el primer enfoque para la determinación de apoptosis, necrosis y autofagia a diferentes dosis infecciosas y tiempos posteriores a la infección con células Clostridium chauvoei. Esto indicaría el estudio de los Mecanismos de muerte celular para dilucidar el poder patógeno de esta bacteria y los tratamientos para evitar las grandes pérdidas económicas producidas en el ganado.