Screening de extractos de plantas para la búsqueda de compuestos bioactivos que interfieran con la lipoilación proteica en Staphylococcus aureus

SCATTOLINI A.; SVETAZ L. A.; SORTINO M. A.; MANSILLA M. C.

Rosario

Jornada; Jornadas de Ciencias, Tecnologías e Innovación.; 2021

Universidad Nacional de Rosario

Las infecciones causadas por la bacteria Gram positiva Staphylococcus aureus resistente a meticilina (MRSA) constituyen un problema de salud global. La creciente aparición de cepas multi-resistentes plantea una demanda social de estrategias alternativas para el descubrimiento de nuevas drogas que controlen a los microorganismos a través de mecanismos no explotados hasta el momento. En nuestro laboratorio nos proponemos identificar compuestos que impidan la lipoilación de proteínas, una modificación postraduccional esencial para el crecimiento y la virulencia de este patógeno. El ácido lipoico (AL) es un cofactor organosulfurado requerido para el funcionamiento de complejos multienzimáticos involucrados en el metabolismo oxidativo y de un carbono. En este trabajo buscamos compuestos que interfieran con la síntesis de AL evaluando el efecto de los mismos sobre el crecimiento de S. aureus NCTC 8325 en medio definido RPMI, o el mismo medio suplementado con los productos de las enzimas lipoiladas (acetato y precursores de los ácidos grasos de cadena ramificada). Los compuestos candidatos serán aquellos que inhiban el crecimiento en RPMI, pero permitan el desarrollo en medios suplementados. Tras analizar el efecto de 100 extractos de plantas sobre la viabilidad de S. aureus se seleccionó el extracto 128. Sin embargo, el crecimiento en RPMI en presencia del extracto 128 también se recobró al agregar sólo acetato, indicando que la inhibición se produciría sobre la actividad de la enzima piruvato deshidrogenasa. Estos resultados se corroboraron al observar bandas de lipoilación en ensayos de Western Blot con anticuerpos anti-AL sobre extractos de proteínas de la cepa cultivada en presencia y en ausencia del extracto. Para dilucidar la naturaleza del compuesto activo en el extracto 128 y poder comenzar su purificación se realizó un ensayo de bioautografía. Tras la separación de los compuestos presentes en el extracto por cromatografía de capa fina, se volcó medio semisólido inoculado sobre esa placa estéril y se incubó a 37°C durante toda la noche. La zona donde se ubicó un halo color crema, por inhibición del crecimiento bacteriano, corresponde a la migración del compuesto activo. La identificación y purificación del inhibidor resulta de interés para el desarrollo de nuevos compuestos quimioterapéuticos dirigidos al tratamiento de enfermedades producidas por MRSA.