UTILIZACIÓN DE DIFERENTES TÉCNICAS PARA CONFIRMAR AUSENCIA DE TOXICIDAD DE CEPAS DE Aspergillus oryzae POTENCIALMENTE BIOREMEDIADORAS DEL HERBICIDA GLIFOSATO EN SUELOS AGRÍCOLAS

CARRANZA CECILIA; MELISA ALUFFI; NICOLÁS BENITO; KAREN MAGNOLI; CARLA BARBERIS; CARINA MAGNOLI

Congreso; Primera Jornada Nacional de Articulación en Docencia, Investigación, Extensión y Servicio de las carreras de Microbiología 2021 (JaCaM; 2021

La utilización de hongos como herramientas biotecnológicas para la remediación de plaguicidascontaminantes de diferentes matrices ambientales está siendo cada vez más estudiado, ya que sonmicroorganismos con una amplia capacidad metabólica, versatilidad y su producción a gran escala resultaeconómica y amigable con el medio ambiente. Sin embargo, la selección de las cepas que van a serincorporadas al ambiente como agentes biorremediadores deben cumplir ciertas características queaseguren su inocuidad. En esta investigación aislamos cepas de Aspergillus oryzae de suelo agrícolacapaces de tolerar y degradar altas concentraciones del herbicida glifosato. Una de las características deestas cepas es que pueden ser capaces de producir una micotoxina muy peligrosa como es la aflatoxina B1(AFB1). Por lo tanto, antes de proponerla como agente de bioremediación debemos asegurarnos que lascepas seleccionadas no produzcan la mencionada micotoxina. Los objetivos de este trabajo fueron: a)determinar mediante una técnica cuantitativa la capacidad de producir AFB1 por tres cepas de A. oryzae concapacidad de degradar glifosato y b) determinar mediante PCR con primers específicos de la vía biosintéticade aflatoxinas (AFs) la ausencia de alguno de estos genes que permiten la producción de AFB1. Las cepasaisladas (AM1, AM2 y GM3) se cultivaron en agar extracto de malta (AEM) y luego se llevó a cabo laextracción de aflatoxinas y su cuantificación por cromatografía líquida de alta precisión (HPLC)1. Paradeterminar la presencia/ausencia de los genes de la vía biosintética de AFs, a partir de los cultivos en AEM,se inocularon Erlenmeyers con 50 mL de medio Wikerman. Los cultivos se incubaron a 25°C por 3 días a150 rpm. El micelio se filtró, lavó y secó para luego ser pulverizado con nitrógeno líquido. Posteriormente serealizó la extracción de ADN genómico y su cuantificación2. Luego se llevó a cabo la amplificación de cuatrode los genes involucrados en la vía de síntesis de las AFs (nor-1, ver-1, omt-A y aflR)3. Como resultadospudimos determinar que las tres cepas de A. oryzae no tuvieron la capacidad de producir AFB1, es decir queno fueron detectadas por la técnica de HPLC. Además, se observó que para las tres cepas de A. oryzaehubo ausencia de algunos de los genes amplificados: AM1: ausencia del gen aflR, AM2: ausencia de losgenes aflR y ver-1, GM3: Ausencia gen omt-A. Estos resultados confirmarían la inocuidad de las cepasbioremediadoras de glifosato y permiten continuar los estudios tendientes a evaluarlas como potencialesproductos biotecnológicos a ser utilizados para disminuir la contaminación con glifosato en los suelosagrícolas. Además, permitió a profesionales microbiólogos aplicar diferentes herramientas diagnósticas(químicas y moleculares) para abordar desde diferentes perspectivas, características importantes ydistintivas de los microorganismos con potencial aplicación tecnológica.