Diseño de un sistema vector-hospedador para la expresión de antígenos heterólogos en esporas de Bacillus subtilis

ACUÑA L; ORTIZ MOYANO R; BELLOMIO A; ACUÑA L; BASOMBRÍO MA ; MARCO JD2

San Miguel de Tucumán

Jornada; XXXI Jornadas Científicas; 2014

Asociación de Biología de Tucumán

Las esporas bacterianas, como modelo de exposición de proteínas, podrían ser una alternativa válida para la formulación de vacunas. La seguridad, estabilidad y fácil manipulación de las esporas de B. subtilis, hace a este sistema de expresión particularmente útil para la expresión en la superficie de moléculas bioactivas como antígenos recombinantes capaces de disparar una respuesta inmune protectiva. Con el objetivo de obtener un sistema de exposición de antígenos en la superficie de las esporas, se realizó una fusión transcripcional entre CotB (una proteína de la capa externa de la espora de Bacillus subtilis) y LbAg3, una proteína inmunogénica de Leishmania (V.) braziliensis, agente causal de Leishmaniasis Tegumentaria Americana. El gen estructural de CotB se amplificó por PCR a partir de B. subtilis 168 y posteriormente se reamplificó utilizando cebadores específicos que incorporan una pequeña región de clonado múltiple hacia el extremo 3'. El amplicón se clonó en el plásmido pRSETa. La región del gen que codifica para LbAg3 se amplificó a partir del plásmido pIVEX-LbAg3 y posteriormente se reamplificó, adicionando hacia el extremo 3 ' un sitio de restricción XmaI, una secuencia que codifica para seis residuos de histidina y un sitio de restricción BamHI. Este amplicón se clonó direccionalmente inmediatamente después de cotB. La fusión génica obtenida cotB-polylinker-lbAg3-6His se digirió con las enzimas HindIII y BamHI y se clonó en el vector de integración pDG364 obteniendo el plásmido denominado pSPOK. La expresión eficaz de la proteína heteróloga en la superficie de la espora y su estabilidad están en proceso de evaluación. Este vector permite la integración de la construcción de interés en el genoma de Bacillus y gracias al sitio de clonado múltiple permitirá trabajar fácilmente con otros genes de interés.