• “La acilación de proteínas no es indispensable para el “targeting” a microdominios de membrana”.

SABINA M. MATÉ; VANESA HERLAX; LAURA BAKÁS

La Plata

Congreso; XXXVII Reunión de SAB; 2008

SAB

Un amplio rango de proteínas contienen ácidos grasos unidos covalentemente. Sin embargo, en procariotas, las proteínas aciladas constituyen una excepción. La atípica acilación en residuos internos de Lys, en procariotas se encuentra solamente en alfa hemolisina (HlyA) de E. coli y en todas las toxinas pertenecientes a la familia RTX (Repeat in toxin). HlyA es una toxina formadora de poros secretada por algunas cepas patógenas de E. coli, que se sintetiza como protoxina, ProHlyA, la cual es activada en el citosol de la bacteria mediante acilación de dos residuos internos de Lys (K 563 and K689). Dicha activación es crítica para los efectos citotóxicos y hemolíticos de la toxina. Por otro lado, está descripto que determinadas toxinas interaccionan con microdominios de membrana de la célula diana que funcionarían como plataformas de concentración y/u oligomerización.  Dichos microdominios se caracterizan por su enriquecimiento en colesterol y esfingolípidos y estarían en fase líquido-ordenada (lo), con las cadenas de ácidos grasos densamente empaquetadas. Se propuso que determinadas proteínas aciladas serían direccionadas hacia los mismos ya que, al estar unidas a ácidos grasos saturados, interaccionarían de manera favorable con dichos microdominios. Nuestro objetivo fue, entonces, estudiar el direccionamiento de HlyA y ProHlyA hacia dominios enriquecidos en colesterol así como su posible oligomerización a nivel de los mismos. Se utilizaron mutantes de Cys de las respectivas proteínas marcadas con Alexa-488 y Alexa-546 para comparar el porcentaje de unión a fantasmas de eritrocitos de carnero. La diferencia en dicho porcentaje no fue significativa. Mediante incubación de fantasmas de eritrocitos de carnero en presencia de HlyA y ProHlyA y posterior obtención de membranas resistentes a detergentes (DRMs), se determinó que tanto la forma activa como la no acilada de la proteína se asociaron con dominios de membrana enriquecidos en colesterol. Utilizando técnicas de FRET se estudió el proceso de oligomerización de ambas proteínas, encontrándose que la forma acilada oligomeriza, mientras que ProHlyA no. En conclusión, los ácidos grasos unidos covalentemente no participarían en el direccionamiento de la toxina hacia microdominios de membrana aunque favorecerían las interacciones proteína-proteína para la oligomerización.