Heregulina activa a Stat3 por un mecanismo dependiente de ErbB-2 Src y las quinasas Janus 1 y 2 en células de cáncer de mama

ROSEMBLIT C ; PROIETTI CJ; BEGUELIN W; MONDILLO C ; CARNEVALE R; RIVAS MA; CHARREAU EH; SCHILLACI R; ELIZALDE PV

Mar del Plata

Congreso; Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Previamente demostramos que la HRG promueve la activación de Stat3 (transductor de la señal y activador de la transcripción 3) en células C4HD provenientes de un adenocarcinoma mamario murino progestágeno-dependiente y en la línea celular de cáncer de mama humano T47D. En el presente trabajo demostramos, mediante ensayos de Western blot, que la fosforilación de Stat3 en el residuo tirosina 705 fue inhibida por el bloqueo de la expresión de ErbB-2, usando oligodeoxinucleótidos antisentido a su ARNm (ASErbB-2), por el pretratamiento con el inhibidor selectivo de ErbB-2 (AG825) y con el inhibidor de Src (PP2). La expresión de las formas inactivas de las Jaks (dominantes negativos: Jak1DN y Jak2DN) también inhibió la fosforilación de Stat3. Mediante ensayos de transfección transiente con un plásmido conteniendo 4 copias de la secuencia de alta afinidad de Stat3, m67, clonadas río arriba de un gen reportero LUC, demostramos que la presencia de los mencionados inhibidores y de los JakDNs bloqueó la capacidad de la HRG de aumentar la actividad transcripcional de Stat3 en ambos tipos celulares. Además, pudimos demostrar la formación de un complejo entre Stat3, Src y ErbB-2 inducido por HRG, mediante inmunoprecipitación. A través de estudios de inmunofluorescencia y análisis por microscopía confocal, determinamos que el mencionado complejo se localiza en el núcleo a los 30 minutos de tratamiento con HRG. El tratamiento con ASErbB-2, AG825 y PP2 inhibió la formación del complejo. Estos resultados demuestran que HRG induce activación transcripcional de Stat3 actuando a través de ErbB-2 por un mecanismo que requiere la activación de Jak1 y 2, Src y ErbB-2 y que HRG es capaz de inducir la formación del complejo ternario entre Stat3, Src y ErbB-2 en células de cáncer de mama humano y murino.