Contribuciones de la vacuola a la variación de la modulación de la frecuencia de las ráfagas de calcio citosólico en respuesta a la feromona sexual en células únicas de saccharomyces cerevisiae

TARKOWSKI, NAHUEL; AGUILAR, PABLO S.; DAWSON, SILVINA PONCE

Capital Federal

Congreso; 103a Reunión de la Asociación Física Argentina; 2018

Facultad de Ciencias Exactar y Naturales

Diferentes estudios muestran que, en respuesta a la feromona, las levaduras aumentan el Ca2+ citosólico y que lo hacen, principalmente, a través de dos sistemas de transporte compuestos por el complejo proteico Mid1-Cch1-Ecm7 y Fig1. El aumento del Ca2+ conduce a la activación eventual del factor de transcripción Crz1 lo que permite controlarla expresión de diversos genes [1-2]. Esta respuesta ha sido ampliamente estudiada solo a nivel poblacional [3-5]. En este trabajo estudiamos la dinámica del Ca2+ al nivel de células únicas de la levadura S. Cerevisiae usando el indicador fluorescente GCamp6f. De este modo observamos que la respuesta a la feromona no está constituida por una única elevación de los niveles de Ca2+ citosólico sino por aumentos transitorios en forma de ráfagas cuya frecuencia parece depender de la concentración de feromona. Esto nos lleva a suponer que la información transmitida por el Ca2+ está codificada en la dependencia temporal de estas ráfagas [6]. Esta distribución puede depender también de las diferentes vías de flujo de Ca2+ hacia y desde reservorios intracelulares. En este trabajo buscamos también determinar si los aumentos de Ca2+ citosólico se deben exclusivamente al importe extracelular o si existe también una liberación desde alguno de estos reservorios, en particular, desde la vacuola. Para ello estudiamos la variación de las distribuciones de las ráfagas de Ca2+ al eliminar la actividad de las vías que permiten el ingreso de Ca2+ a la vacuola mutando los genes que codifican para las proteínas involucradas en estas vías. Finalmente estudiamos la correlación entre la activación de Crz1 y los pulsos de Ca2+ citosólico en presencia de feromona monitoreando simultáneamente los niveles de ambas sustancias con dos indicadores fluorescentes que se localizan en distintas regiones de la célula.