EL USO DE MODULADORES DE AMPc AUMENTA LA PRODUCCIÓN Y CALIDAD DE EMBRIONES BOVINOS

M NAVARRO; M WAREMKRAUT; C BLUGUERMANN; A MUTTO

Buenos Aires

Jornada; V jornadas internacionales del instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA; 2017

Instituto de Investigación y Tecnología en Reproducción Animal (INITRA)

Uno de los puntos centrales de las técnicas de producción in vitro de embriones (PIV) es obtener oocitos competentes que logren dirigir el desarrollo inicial de un embrión. Las gametas femeninas obtenidas tanto de ovarios de animales cadavéricos como de aspiración folicular in vivo, poseen diferentes grados de competencia. Este es uno de los motivos por los que la PIV es un proceso ineficiente en comparación a la producción de embriones in vivo. La maduración prematura del oocito cuando éste es apartado del ambiente folicular, resulta en una pérdida de la capacidad funcional de la maquinaria citoplasmática, la cual es necesaria para dirigir las posteriores etapas del desarrollo embrionario.Trabajos previos han propuesto un sistema de maduración in vitro (MIV) en dos fases que involucra el uso de moduladores de Adenosin Monofosfato Cíclico (AMPc). Esta maduración consiste en una primera etapa donde se utiliza un activador de la Adenilato Ciclasa junto a un inhibidor inespecífico de fosfodiesterasas con el fin de retrasar el comienzo de la metafase II (MII); y en una segunda etapa donde se utiliza un inhibidor específico de la fosfodiesterasa 3A y rhFSH con el objetivo de promover la maduración oocitaria en forma sincronizada. De esta forma, al retrasar la reasunción meiótica del oocito, se emulan las vías fisiológicas de la maduración que ocurren in vivo, lo cual resultaría en un aumento de la producción y calidad embrionaria.En este trabajo evaluamos el grado de estrés de oocitos en MII provenientes del tratamiento, analizando transcriptos (ARNm) involucrados en vías de plegado de proteínas y apoptosis por PCR en tiempo real. Adicionalmente, analizamos parámetros usuales en un sistema de PIV tales como porcentajes de maduración, clivaje, producción y calidad embrionaria. Por último, se evaluó la calidad citoplasmática de los oocitos tratados mediante el análisis de la actividad mitocondrial a distintos tiempos madurativos.Se observó que el tratamiento bifásico no produjo cambios significativos en genes marcadores de estrés celular ni en los porcentajes promedio de maduración y clivaje embrionario. Sin embargo, observamos que el tratamiento aumentó significativamente la tasa de producción embrionaria y la calidad de los embriones producidos incrementando los niveles de eclosión, cinética de desarrollo, número de células por embrión, y resistencia a la criopreservación. Además, comprobamos que los embriones derivados del tratamiento fueron capaces de establecer preñeces. Por último, se observó que los oocitos tratados presentaron mayor actividad mitocondrial a las 7 y 15 horas de iniciada la MIV.En base a estos resultados, podemos concluir que el uso de moduladores de AMPc durante la MIV aumenta la competencia oocitaria, mejorando la calidad citoplasmática y obteniéndose una mayor producción y calidad embrionaria.