"Efecto de modificadores en la fluorescencia del ácido 5-hidroxi-3-indolil-acético"

A. GUILLERMO BRACAMONTE; ALICIA V. VEGLIA

Facultad de Bioquímica y Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional del Litoral, Santa Fé, Santa Fé, Argentina.

Congreso; XXIV Congreso Argentino de Química; 2002

Asociación Argentina de Química

El ácido 5-hidroxi-3-indolil-acético (5HIA) es el metabolito principal de la hormona serotonina que actúa como neurotransmisor y ha sido relacionada con enfermedades mentales y tumores carcinoides.            La estimación de serotonina en sangre y orina está limitada  debido a su baja concentración y complicaciones metodológicas. El método más práctico es la determinación de su metabolito mediante un ensayo colorimétrico por espectrofotometría UV-Visible. Métodos fluorimétricos han sido reportados en medios fuertemente ácidos, pese a que es conocido que los compuestos indólicos sufren disminución de  fluorescencia (quenching) a pH ácidos.             En busca de métodos más sensibles para la determinación de 5HIA a estos pHs,  hemos estudiado el efecto de modificadores de fluorescencia como son las ciclodextrinas (CD, oligómeros cíclicos de glucosa). Estos compuestos  macrocíclicos generalmente  producen cambios fotofísicos en los sustratos con los que interaccionan por formación de complejos huésped-receptor.             Los receptores estudiados fueron bciclodextrina (bCD) e  hidroxipropilbciclodextrina (HPbCD). El estudio fluorimétrico se realizó a 25,0 ºC con lex= 278,0 nm. Se trabajó en medio ácido hasta pH=2,00 para que sólo la especie sin ionizar del sustrato sea responsable de la señal medida.             Mediante la intensificación de fluorescencia en presencia de concentraciones crecientes de receptores a pH=2,00 se determinaron las constantes de asociación con los receptores (KA/ M-1) con valores de 56±9 y 148±8 y relaciones de rendimiento cuántico (fSCD/fS) de 1,9±0,4 y 3,2±0,2 para bCD e HPbCD respectivamente. La disminución de fluorescencia observada con el aumento de la concentración de protones entre 0,01 y 0,20 M, se ajustó mediante la ecuación de Stern-Volmer, con constantes de quenching (KQ/M-1) para el sustrato libre de 2,02±0,06 y acomplejado de 1,29±0,07 (con bCD) y 1,05±0,03 (HPbCD). Estos resultados indican que las ciclodextrinas actúan como protectores del estado excitado del sustrato hacia agentes desactivadores o quenchers de su respuesta fluorescente.