“Validación de un método espectrofluorimétrico con hidroxipropilciclodextrina para la determinación de indoles en muestras reales”

A. GUILLERMO BRACAMONTE; ALICIA V. VEGLIA

Huerta Grande, Córdoba

Congreso; II Congreso Argentino de Química Analítica; 2003

Sociedad Argentina de Química Orgánica

Una gran cantidad de derivados indólicos juegan un rol biológico importante como hormonas, neurotransmisores o fármacos y tanto éstos como sus metabolitos requieren de métodos sencillos y confiables para su determinación en fluidos biológicos.             En nuestro grupo de investigación hemos estudiado la influencia de ciclodextrinas en las propiedades fluorescentes de indoles sencillos como escatol (3-metilindol, metabolito del triptófano); ácido 3-indolil-acético (precursor del escatol en mamíferos y hormona vegetal ingerida en la dieta); melatonina (N-acetil-5-metoxi-3-(2-aminoetil)indol, hormona producida por la glándula pineal en mamíferos y empleada como fármaco) y 5-metoxitriptamina (5-metoxi-3-(2-aminoetil)indol, precursor de melatonina y usado como fármaco). En todos los casos se encontró interacción con b-ciclodextrina e hidroxipropil-b-ciclodextrina, con intensificación de la señal fluorescente (20-100%) y en algunos casos desplazamiento de la lmáx de emisión (2,0-14,0 nm). Los mejores límites de detección (LOD, ng/ml), se obtuvieron con hidroxipropil-b-ciclodextrina (10 mM; 25,0 ºC y pH= 7,00) por espectrofluorimetría directa (LOD = 0,20 - 0,70) para los compuestos individuales o por espectrofluorimetría de derivadas para mezclas binarias de compuestos (LOD = 2,0 - 7,0).             En este trabajo se analiza la selectividad de la determinación de estos derivados indólicos en fluidos biológicos (orina humana de adulto sano). El método de adiciones estándar arrojó resultados satisfactorios para las recuperaciones (95-105%) de los fortificados de matrices procesadas por métodos  convencionales de literatura (extracción con éter y posterior extracción con buffer a pH= 7,00). Sin embargo la eficiencia del proceso de extracción de estos indoles en muestras previamente fortificadas no dio buenos resultados y debió ser modificado. En base a la recuperación en la fase buffer de los indoles aniónicos a pH= 7,00 (ácido 3-indolil-acético) el método que resultó más eficiente consistió en aumentar a cinco las extracciones con éter y a cuatro las extracciones con buffer, tal que la suma de los volúmenes de las alícuotas de cada uno de los solventes resulte igual al utilizado en una sóla extracción por el método convencional. Por otra parte, mediante este proceso de extracción, los indoles neutros son transferidos totalmente a la fase etérea pero no se recuperan o se recuperan parcialmente en la extracción con buffer a pH= 7,00; indicando que la característica  polar/apolar de la cadena que sustituye la posición 3 del núcleo indólico es la responsable de la distribución en la mezcla orgánica/acuosa. Por lo tanto, la matriz fue extraída solamente con éter, este extracto fue concentrado, lavado con metanol, reevaporado y retomado con un pequeño volumen de metanol. Los ensayos de recuperación para cada uno de los compuestos indólicos de interés se realizaron mediante el método de adiciones estándar sobre diluciones de esta matriz a pH=7.00 y con hidroxipropil-b-ciclodextrina. Se fortificó a cuatro niveles de concentración por duplicado, dentro de los rangos lineales, con buenas recuperaciones (95-105 %) y coeficientes de variación (3-5 %) que indican la aplicabilidad del método.