“Determinación de hidroxindoles de importancia biológica mediante espectrofluorimetría intensificada con ciclodextrinas a distintos pH”

BRACAMONTE, A. GUILLERMO; VEGLIA ALICIA V.

Villa de Merlo, San Luis, Argentina

Congreso; III Congreso de Química Analítica; 2005

Asociación Argentina de Químicos Analíticos

Los compuestos hidroxindólicos cumplen importantes roles biológicos como hormonas, neurotransmisores o fármacos y tanto éstos como sus metabolitos requieren de métodos  confiables y con buenos límites de detección (LOD).  En este trabajo los hidroxindoles empleados son, la serotonina (5-hidroxitriptamina, 5HT), importante neurotransmisor del sistema nervioso central y su metabolito principal el ácido 5-hidroxi-3-indolilacético (5HIA). Ambos compuestos tiene dos protones móviles involucrando, dependiendo del pH, distintas especies ácido-base con diferentes características fluorescentes. Además se observa desactivación o quenching de fluorescencia a pH < 2 y pH > 11. Las ciclodextrinas (oligómeros cíclicos de glucosa, CD) pueden formar complejos de inclusión con variados compuestos y esta interacción se traduce en cambios en las propiedades físicas y químicas de los mismos. Debido a que varias metodologías para la determinación de estos compuestos utilizan medios fuertementes ácidos, el objetivo de este trabajo es llevar a cabo un estudio del efecto de CD (10 mM, pKa » 12,1), como b-ciclodextrina (bCD) e hidroxipropil-b-ciclodextrina (HPbCD) en la fluorescencia de estos compuestos a  pH 2, 7 y 13. A pH 2 y 7 se puede determinar el efecto de las CD neutras y a pH 13 el de las ionizadas, sobre las distintas especies de los compuestos. En todos los casos se observó incremento en la fluorescencia en presencia de CD, siendo los mayores a pH 2 para 5HIA 30 % y 120 % y a pH 13 para 5HT, 500 % y 700 %, con bCD e HPbCD respectivamente. En busca de una aplicación analítica, se determinaron los valores de las sensibilidades de calibración (m, pendiente de la curva) y los LOD calculados según IUPAC (3sb/m), en presencia y ausencia de CD.  Los mejores LOD (ng/mL) fueron determinados a pH 2, con valores de 0,37 para 5HT y 0,50 para 5HIA. Se discutirán los resultados obtenidos de la aplicación de este método en muestras reales. Ambos compuestos tiene dos protones móviles involucrando, dependiendo del pH, distintas especies ácido-base con diferentes características fluorescentes. Además se observa desactivación o quenching de fluorescencia a pH < 2 y pH > 11. Las ciclodextrinas (oligómeros cíclicos de glucosa, CD) pueden formar complejos de inclusión con variados compuestos y esta interacción se traduce en cambios en las propiedades físicas y químicas de los mismos. Debido a que varias metodologías para la determinación de estos compuestos utilizan medios fuertementes ácidos, el objetivo de este trabajo es llevar a cabo un estudio del efecto de CD (10 mM, pKa » 12,1), como b-ciclodextrina (bCD) e hidroxipropil-b-ciclodextrina (HPbCD) en la fluorescencia de estos compuestos a  pH 2, 7 y 13. A pH 2 y 7 se puede determinar el efecto de las CD neutras y a pH 13 el de las ionizadas, sobre las distintas especies de los compuestos. En todos los casos se observó incremento en la fluorescencia en presencia de CD, siendo los mayores a pH 2 para 5HIA 30 % y 120 % y a pH 13 para 5HT, 500 % y 700 %, con bCD e HPbCD respectivamente. En busca de una aplicación analítica, se determinaron los valores de las sensibilidades de calibración (m, pendiente de la curva) y los LOD calculados según IUPAC (3sb/m), en presencia y ausencia de CD.  Los mejores LOD (ng/mL) fueron determinados a pH 2, con valores de 0,37 para 5HT y 0,50 para 5HIA. Se discutirán los resultados obtenidos de la aplicación de este método en muestras reales. Ambos compuestos tiene dos protones móviles involucrando, dependiendo del pH, distintas especies ácido-base con diferentes características fluorescentes. Además se observa desactivación o quenching de fluorescencia a pH < 2 y pH > 11. Las ciclodextrinas (oligómeros cíclicos de glucosa, CD) pueden formar complejos de inclusión con variados compuestos y esta interacción se traduce en cambios en las propiedades físicas y químicas de los mismos. Debido a que varias metodologías para la determinación de estos compuestos utilizan medios fuertementes ácidos, el objetivo de este trabajo es llevar a cabo un estudio del efecto de CD (10 mM, pKa » 12,1), como b-ciclodextrina (bCD) e hidroxipropil-b-ciclodextrina (HPbCD) en la fluorescencia de estos compuestos a  pH 2, 7 y 13. A pH 2 y 7 se puede determinar el efecto de las CD neutras y a pH 13 el de las ionizadas, sobre las distintas especies de los compuestos. En todos los casos se observó incremento en la fluorescencia en presencia de CD, siendo los mayores a pH 2 para 5HIA 30 % y 120 % y a pH 13 para 5HT, 500 % y 700 %, con bCD e HPbCD respectivamente. En busca de una aplicación analítica, se determinaron los valores de las sensibilidades de calibración (m, pendiente de la curva) y los LOD calculados según IUPAC (3sb/m), en presencia y ausencia de CD.  Los mejores LOD (ng/mL) fueron determinados a pH 2, con valores de 0,37 para 5HT y 0,50 para 5HIA. Se discutirán los resultados obtenidos de la aplicación de este método en muestras reales. Ambos compuestos tiene dos protones móviles involucrando, dependiendo del pH, distintas especies ácido-base con diferentes características fluorescentes. Además se observa desactivación o quenching de fluorescencia a pH < 2 y pH > 11. Las ciclodextrinas (oligómeros cíclicos de glucosa, CD) pueden formar complejos de inclusión con variados compuestos y esta interacción se traduce en cambios en las propiedades físicas y químicas de los mismos. Debido a que varias metodologías para la determinación de estos compuestos utilizan medios fuertementes ácidos, el objetivo de este trabajo es llevar a cabo un estudio del efecto de CD (10 mM, pKa » 12,1), como b-ciclodextrina (bCD) e hidroxipropil-b-ciclodextrina (HPbCD) en la fluorescencia de estos compuestos a  pH 2, 7 y 13. A pH 2 y 7 se puede determinar el efecto de las CD neutras y a pH 13 el de las ionizadas, sobre las distintas especies de los compuestos. En todos los casos se observó incremento en la fluorescencia en presencia de CD, siendo los mayores a pH 2 para 5HIA 30 % y 120 % y a pH 13 para 5HT, 500 % y 700 %, con bCD e HPbCD respectivamente. En busca de una aplicación analítica, se determinaron los valores de las sensibilidades de calibración (m, pendiente de la curva) y los LOD calculados según IUPAC (3sb/m), en presencia y ausencia de CD.  Los mejores LOD (ng/mL) fueron determinados a pH 2, con valores de 0,37 para 5HT y 0,50 para 5HIA. Se discutirán los resultados obtenidos de la aplicación de este método en muestras reales.