TERAPIA FOTODINAMICA EN CULTIVOS DE CELULAS HeLa CON APLICACION DE TEMOPORFIRINA Y RADIACION DE 650 nm

ETCHEVERRY, MARÍA EUGENIA, GALARZA, CELESTE, PASQUALE, MIGUEL ANGEL, Y GARAVAGLIA, MARIO

La Plata

Encuentro; EEOF-TOPFOT; 2012

CONICET

La terapia fotodinámica (TF), si bien se conoce hace más de un siglo, se comenzó a utilizar como un tratamiento efectivo contra ciertos tipos de cánceres desde el advenimiento del láser en 1960. En este trabajo se presentan resultados de TF sobre cultivos de colonias de células tumorales de cáncer de cuello uterino (HeLa), empleando como fuente de radiación una lámpara LED que emite en 650 nm con una potencia de 0.9 W. Se utilizó la temoporfirina FoscanR, Cloruro de (meta-tetra(hidroxifenilo)), que es un fotosensibilizador de segunda generación, con mejoras en las propiedades químicas y fotofísicas. Su uso está aprobado para el tratamiento de pacientes con cánceres avanzados de cabeza y cuello y carcinomas escamosos. Las células HeLa (pasaje 48) se cultivaron en medio RPMI conteniendo 10% de suero fetal bovino sembrando 7500 células por cm2 y manteniendo la temperatura a 37 C y una atmósfera de 5% en dióxido de carbono y 97% de humedad. Luego de la siembra los cultivos se incubaron durante 24 hs y se utilizaron para los estudios fotodinámicos. Una vez incorporado el fotosensibilizador, los cultivos fueron manipulados en cajas opacas para evitar el efecto de la luz natural. La concentración de FoscanR (cF) se varió entre 0,05 ≤ cF ≤ 80 g/ml y los tiempos de aplicación de la droga (tF) en el intervalo 90 ≤ tF ≤ 4320 min. La dosis de radiación se aplicó durante 2 ≤ tR ≤ 18 min en forma continua o fraccionada. Ocasionalmente se realizaron comparaciones con un láser Medligth FD1 de uso clínico que emite en 652 nm. La viabilidad de las células antes y posterior al tratamiento se evaluó mediante colorantes supravitales convencionales y microscopía óptica. La localización intracelular del fotosensibilizador se estudió mediante microscopía de fluorescencia; el fotosensibilizador se localizó en el aparato de Golgi y el retículo endoplasmático. La concentración en el retículo endoplasmático aumentó con el tiempo de absorción de la droga. El estudio de distintas concentraciones de FoscanR mostró que para cF > 40 g/ml y tF > 24 hs, la droga presenta toxicidad natural hacia las células en cultivo, aún en ausencia de radiación. Para las otras concentraciones ensayadas las células permanecen viables mientras no son sometidas a las dosis de radiación. Para cF < 0,05 g/ml, tF = 2880 min y tR = 10 min, ya no se observó efecto sobre las células y el cultivo continuó en proliferación. Para concentraciones de droga superiores a 0,05 g/ml se logra un mayor deterioro con el aumento de tF y tR. Para las concentraciones cF más altas ensayadas los daños celulares se observaron incluso durante la aplicación de la radiación: en las células comenzaron a aparecer vacuolas al tiempo que disminuía su área de adherencia con el substrato. Luego de 24 hs del tratamiento la cantidad de muerte aumentó para todas las concentraciones donde es efectiva la concentración de la droga. Los resultados preliminares de este trabajo indican que la fuente de radiación empleada resulta útil para los estudios fotodinámicos para modelos in vitro, y en el futuro deberá probarse su utilidad para modelos animales in vivo.