Caracterización bioquímica y molecular de las proteínas TolT de Trypanosoma cruzi

LOBO, MAITE MABEL; BALOUZ VIRGINIA; CÁMARA, MARÍA DE LOS MILAGROS; BUSCAGLIA, CARLOS ANDRÉS

Resistencia, Chaco

Congreso; XXX Reunión de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2018

Sociedad Argentina de Protozoología

TolT fue caracterizado originalmente como un antígeno flagelar de tripomastigotes de T. cruzi, codificado por un reducido número de genes homólogos dispuestos en tándem. Posteriormente, se determinó que era blanco de una fuerte respuesta inmune celular y humoral en animales, por lo que se evaluó su potencial como candidato vacunal y reactivo para serodiagnóstico. Búsquedas en bases de datos más recientes revelaron una mayor complejidad para los genes TolT en tripanosomátidos, tal que agrupamos sus secuencias, en 3 subfamilias llamadas TolT-A, TolT-B y TolT-C. Se procedió con la caracterización preliminar de estas subfamilias, determinándose que, estructuralmente, con algunas excepciones, sus miembros poseen un péptido señal clivable en el extremo N-terminal seguido por una región madura más conservada con algunos motivos y residuos Cys conservados y una señal de anclaje por GPI en su extremo C-terminal; además TolT-A y B son muy similares entre sí hacia su región C-terminal (desde aa 180), mientras que TolT-C diverge globalmente de estas. Sin embargo, a pesar del alto grado de similitud estructural entre secuencias, tanto sus perfiles de expresión a nivel de ARN y proteína a lo largo del ciclo de vida del parásito como los antigénicos son diferentes, fundamentando la agrupación en subfamilias. Recientemente, nos adentramos en un análisis más exhaustivo con el objetivo de iniciar una futura caracterización funcional de TolT. En primer lugar la secuenciación del genoma de TCC, cepa híbrida de igual linaje que CL Brener, permitió definir la disposición de las secuencias en el genoma. Luego ampliamos la caracterización proteica a nivel subcelular, donde observamos que, en tripomastigotes, la localización de las 3 subfamilias se extiende a lo largo de la superficie del flagelo mientras que en amastigotes cada una de ellas se restringe a regiones discretas particulares. Además, exploramos el posible rol estructural de 2 residuos Cys presentes en la región madura de todos los productos TolT, determinando que in vivo solamente TolT-B se ensambla en oligómeros (posiblemente trímeros) en la superficie de tripomastigotes y que estos se enlazan por enlaces covalentes intermoleculares. Finalmente, extendimos el análisis del perfil antigénico a otras especies con el cual confirmamos lo observado en humanos: TolT es un importante target durante la infección por T. cruzi y su reconocimiento parece estar dirigido hacia el extremo C-terminal común a TolT-A y B.