OPTIMIZACIÓN DE MÉTODOS IN VITRO PARA EVALUAR LA ACTIVIDAD CITOTÓXICA DE BIOACTIVOS EXTRAÍDOS DE CÁSCARA DE NUEZ PECÁN

GASSER F; RIBAS, L; RENNA, MS; MARELLI B; ORTEGA H.H.; VAN DE VELDE, F; SAVINO, G; HEIN G; BARAVALLE M.E

Rosario

Congreso; II Reunión Científica Internacional. VII Reunión Científica Regional. VI Congreso Nacional de Ciencia y Tecnología de Animales de Laboratorio. AACyTAL 2021; 2021

Asociación Argentina de Ciencia y Tecnología de Animales de Laboratorio

Las pruebas biológicas son necesarias para comprobar la eficacia y seguridad de un nuevo bioactivo y los ensayos in vitro con líneas celulares son ampliamente empleados en estas evaluaciones. Las líneas celulares son utilizadas como métodos alternativos y/o complementarios a la utilización de animales de laboratorio, permitiendo realizar pruebas rápidas y directas, con posibilidad de detección de efectos a largo plazo y con la ventaja de poder controlar las condiciones experimentales. Existen evidencias de que los bioactivos extraídos de la cáscara de nuez pecán presentan actividad citotóxica sobre algunas líneas celulares tumorales. El objetivo del presente trabajo fue optimizar distintos métodos in vitro a partir de cultivos celulares para evaluar la actividad citotóxica de bioactivos extraídos de dos variedades de nuez pecán.Los bioactivos fueron obtenidos mediante extracción acuosa a partir de cáscara de nuez pecán (Carya illinoinensis) de las variedades Marameck y Mahan. La actividad citotóxica y el mecanismo de muerte celular, luego de la exposición de los bioactivos por triplicado sobre cultivos celulares de la línea de adenocarcinoma de colon HT-29, fue determinada a través de la evaluación de viabilidad utilizando MTT y espectrofotometría. También se analizó la inducción de apoptosis mediante el uso del kit Anexina V y citometría de flujo. La actividad genotóxica se realizó mediante la evaluación de la frecuencia de micronúcleos utilizando tinción con DAPI y microscopía de epifluorescencia. Se utilizó doxorrubicina y peróxido de hidrógeno como controles positivos.Se observó que ambos productos poseen actividad citotóxica cuando se los enfrenta a células HT-29 y dicha actividad es dependiente de la concentración de bioactivo utilizado, siendo similar para las dos variedades. Los resultados obtenidos indican que ambos bioactivos utilizan la inducción de apoptosis como mecanismo principal de muerte celular, resultando la variedad Mahan la que induce el mayor el índice de apoptosis (p < 0.05). Respecto a la evaluación de genotoxicidad, como medida del daño al ADN, se observó que los dos bioactivos evaluados poseen actividad genotóxica frente a las células tumorales de colon de manera similar a la que posee doxorrubicina y menor a la actividad del peróxido de hidrógeno (p < 0.05). Los resultados obtenidos a través de estos ensayos permiten disponer de una batería de métodos in vitro para la evaluación inicial de distintos bioproductos o fármacos. Por otro lado, los resultados generados permiten considerar a los bioactivos obtenidos de cáscara de nuez pecán, como productos de interés y una alternativa potencial al tratamiento de diferentes tipos de cáncer.