Nuevas Aplicaciones de la Tecnica Amino-Cupro-Argentica (A-Cu-Ag) y su Comparaci¨®n con Fluoro-Jade B (FJ-B) en la Eficacia para Detectar Neurodegeneracion Inducida por MK801, Etanol y Acido Quinol¨ªnico.

BENDER C; DE OLMOS S; MANZINI F; DE OLMOS J

Huerta Grande, C¨®rdoba

Congreso; VIII Taller Argentino de Neurociencias; 2006

Dentro de las herramientas disponibles para el analisis neurotoxicologico en animales intactos, las tecnicas de impregnacion argentica se destacan por su sensibilidad y especificidad en la deteccion de procesos neurodegenerativos.  Recientemente se ha introducido un marcador fluorescente, llamado Fluoro-Jade, que tambie¦n ha demostrado ser mas sensible y especifico que las te¦cnicas tradicionales de histopatologia (H&E, Nissl, etc).             El objetivo de este trabajo fue comparar la tecnica FJ- B (Schmued & hopkins, 2000) con la tecnica A-Cu-Ag (de Olmos et al., 1994); el protocolo arge¦ntico mas reciente.  Para ello se utilizaron ratas adultas de la cepa Wistar tratadas con tres drogas que provocan degeneracion neuronal: MK801, etanol y acido quinolinico. Los animales tratados con MK801 recibieron una dosis de 5 o 10 mg/kg, i.p. y tuvieron una sobrevida de 72 h. Las ratas tratadas con alcohol recibieron 6 administraciones i.g. cada 8 horas. Cada una de las dosis variaron entre 5 y 0  g/kg  en funcion del estado de intoxicacion de los animales, el cual fue estimado mediante ¨ªndices comportamentales. La sobrevida fue de 3 horas luego de la ultima administracion. Finalmente, el acido quinolinico fue microinyectado en el estriado en un volumen de 0.4 ul (400 ng/¦ul) y se estudiaron sobrevidas de 6, 12, 24 y 48 h..             Todos los animales fueron prefundidos transcardiacamente con soluci¨®n lavadora (Glucosa 0,4 %, Sucrosa 0.8 %, NaCl, 0,8%) y solucion fijadora (Paraformaldehido 4 %; acido borico 1%; di-sodio tetra-borato 0,38%; sulfito de sodio 0,004%). Los cerebros fueron cortados con microtomo a 40 ¦Ìm de espesor y las secciones almacenadas seriadamente en la soluci¨®n fijadora, para los cortes designados a la tecnica A-Cu-Ag, o en KPBS 0,01M, para los cortes destinados al metodo FJ-B.             Por otro lado tambien se realizaron experimentos cuya meta fue determinar si la tecnica A-Cu-Ag podia combinarse con tecnicas inmunohistoquimicas. Esto fue evaluado con anticuerpos contra el amiloide beta contra fluoro-gold.              Los resultados de estos trabajos sugieren que la tecnica A-Cu-Ag es mas sensible en la deteccion de neurodegeneracion que el FJ-B. Especialmente cuando se trata de procesos degenerativos en las terminales nerviosas y/o cuando la injuria no es masiva. Ademas pudimos demostrar la viabilidad de combinar en un mismo corte, te¦cnicas inmunohistoquimicas con la tecnica A-Cu-Ag. Este hallazgo abre nuevas alternativas en la investigacion de procesos neurodegenerativos.