Acumulación de fotosensibilizantes naturales en leucocitos

COMINI, L.R.; NÚÑEZ MONTOYA, S.C.; BECERRA, M.C.; ALBESA, I.; CABRERA, J.L.

Villa Giardino, Córdoba

Jornada; XV JORNADAS CIENTÍFICAS DE LA SOCIEDAD DE BIOLOGÍA DE CÓRDOBA. SBC.; 2005

Sociedad de Biología de Córdoba

Heterophyllaea pustulata Hook. f. (Rubiáceas) es un arbusto que habita en el NO argentino y se conoce popularmente como “cegadera”, en referencia a la pérdida de visión que provoca en los animales que la ingieren y se exponen a la luz solar. A partir de sus hojas y tallos fueron aisladas nueve antraquinonas (AQs) mayoritarias: soranjidiol (AQ1), 1-metil éter de soranjidiol (AQ2), rubiadina (AQ3), 1-metil éter de rubiadina (AQ4), damnacantal (AQ5), damnacantol (AQ6), 1,6-dihidroxi-7-metoxi-2metil antraquinona (AQ7), 2-hidroxi-7-metil-3metoxi antraquinona (AQ8) y 5,5´-bis-(1,6-dihidroxi-2metil antraquinona) (AQ9). Las propiedades fotosensibilizantes de estas AQs se comenzaron a estudiar a fin de asociarlas con la reacción de fotosensibilización descripta para esta planta. Previamente, hemos demostrado que estos derivados antraquinónicos son capaces de generar anión superóxido  in vitro cuando son expuestos a la luz UV (fotosensibilización Tipo I). La capacidad de estos derivados para generar anión superóxido fue  determinada mediante la aplicación de un  ensayo fotobiológico indirecto en leucocitos humanos y en presencia de AQs,  bajo condiciones de oscuridad y radiación UV.  La generación de anión superóxido  puede ser intra o extraceluar. En ésta oportunidad, se realizó un ensayo de acumulación de antraquinonas en leucocitos para así estimar si la producción de anión superóxido es  intracelular. En una primera instancia, para realizar este ensayo elegimos AQ5 debido a que produce la mayor fotoestimulación del metabolito oxidativo. Los leucocitos fueron incubados con AQ5 durante 30 minutos a 37 ºC. El control fue procesado sin AQ-5 bajo las mismas condiciones. Luego de este tiempo las muestras fueron centrifugadas y el pellet fue tratado con DMSO para permitir la liberación intracelular de la antraquinona. Se centrifugo nuevamente y la concentración de AQ5 en este último sobrenadante fue determinada por espectrofotometría UV-Visible a 390 nm, previa confección de la curva de trabajo correspondiente en DMSO. Los resultados mostraron que AQ5 tiene capacidad de acumularse en el interior de las células (40,6 ± 11,8 %) y esto, permite estimar que la generación de ROS podría ser intracelular. Teniendo en cuenta que las AQs en estudio poseen coeficientes de partición semejantes, lo cual fue demostrado mediante ensayos que hemos realizado anteriormente, podría estimarse que los derivados antraquinónicos aislados de H. pustulata, presentarían un comportamiento similar en cuanto a la capacidad de acumulación en leucocitos.