Estudio comparativo de la agregación amiloide de Gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa humana y de conejo

VERA, CECILIA; TORRES-BUGEAU, CLARISA

Jornada; XXII Jornadas Jóvenes Investigadores de la Asociación de Universidades del Grupo Montevideo (AUGM); 2014

A partir de resultados previos de nuestro grupo de trabajo, se propuso que ciertos intermediarios en el proceso de agregación amiloide de Gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) de conejo son capaces de modular la cinética de agregación de alfa-sinucleína (AS), secuestrando especies tóxicas involucradas en la propagación del daño neuronal asociado a la enfermedad de Parkinson. Ante la posibilidad de plantear una aplicación terapéutica de los agregados de GAPDH, adquiere importancia el estudio del proceso de agregación amiloide de GAPDH humana, para evaluar si las propiedades de sus intermediarios se corresponden con las observadas a partir de su ortólogo en conejo.Mediante herramientas bioinformáticas, se analizaron comparativamente las estructuras primarias y terciarias de ambas proteínas. Para el abordaje experimental, se expresó y purificó GAPDH humana recombinante. Los procesos de agregación amiloide de GAPDH humana y de conejo fueron comparados en términos de sus perfiles cinéticos, las características estructurales de sus intermediarios, y la capacidad de estos últimos de prevenir el efecto desestabilizante de oligómeros de AS sobre membranas lipídicas. Las técnicas empleadas fueron espectroscopía de fluorescencia, cromatografía de exclusión molecular, fotoentrecruzamiento seguido de SDS-PAGE y ensayos de pérdida de contenido de vesículas lipídica. En conjunto, los resultados obtenidos confirman el efecto nulo de las mutaciones sobre el proceso de agregación de GAPDH esperado a partir de los estudios biocomputacionales.