Ophioviridae: estudio de la expresión del genoma

ELIANA EVELINA OCOLOTOBICHE; MARÍA LAURA GARCÍA

BUENOS AIRES

Encuentro; XXXIII REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE VIROLOGÍA; 2013

SOCIEDAD ARGENTINA DE VIROLOGÍA

es una familia de virus de plantas cuyo genoma está constituido por tres o cuatro ssRNA de polaridad negativa, no poseen envoltura, el virión consiste de nucleocápsides circulares abiertas o superenrolladas. El miembro tipo de la familia es (CPsV), es tripartito y codifica para 4 genes, todos localizados en la cadena viral complementaria (vc). En el vcRNA3 se encuentra la secuencia que codifica para la proteína de cubierta y en el vcRNA2, aquella para una proteína de movimiento célula a célula, que además posee actividad supresora. Mediante análisis informático, se determinó que en el extremo 5´ de la vcRNA1 se encuentra el gen 24k, y separado por una región intergénica, el gen 280k, la polimerasa viral o RdRp. La proteína 24K no presenta similitud con ninguna proteína de los bancos de datos, y por su localización genómica resulta de mucho interés. Primeramente, fue demostrada la presencia de la proteína 24K en plantas infectadas usando un antisuero específico. Confirmando la asignación del gen 24k, nos preguntamos ¿cómo se expresan los dos genes del RNA1 de CPsV? Se plantean tres hipótesis: A) un mRNA monocistrónico para cada gen; B) un mRNA bicistrónico; C) un mRNA monocistrónico para el gen 24k y un mRNA transcripto completo del RNA 1 monocistrónico para la RdRp. Éstos transcriptos se encontrarían en muy baja cantidad, ya que aún no han sido detectados por Northern blot. Mediante determinación de los extremos 3´y 5´ de los mRNAs, resultados preliminares de 3´RACE indicarían la existencia de un mRNA monocistrónico del gen 24k. Si se tratara de las hipótesis B o C, se podría esperar que la traducción del gen 280k fuera iniciada por reconocimiento de una estructura tipo IRES () o por interacción RNA-RNA mediante ?Elementos traduccionales en la región 3´UTR independientes de cap?. Se realizaron predicciones de estructuras sobre la secuencia del vcRNA1 de CPsV, pero éstos elementos no se han encontrado, mientras que la región 5´UTR del vcRNA1 arrojó similitud de estructura con el IRES de Human poliovirus 1. Las modificaciones en los extremos de los mRNAs virales, la adhesión de una estructura tipo en el 5´ y poliadenilación en el extremo 3´ también son objeto de estudio. Hemos determinado, mediante 3´RACE (Rapid Amplification of cDNA Ends), que el extremo 3´ del mRNA3 de CPsV finaliza en una señal de poliadenilación AAUAAA seguida de poliAs de hasta 76nt, y resultados preliminares indican la existencia de un mRNA 24k también poliadenilado. Sobre la base de estos resultados y sabiendo que las partículas virales no sólo presentan RNA viral, sino que también se encapsidan los tres vcRNAs, se evaluó la posibilidad de que éstos vcRNAs pudieran tratarse de mRNAs virales y por ende, poliadenilados. Resultados preliminares indican que las partículas virales no contienen mRNAs poliadenilados. Se ha demostrado que la mayoría de los virus segmentados de ssRNA de polaridad negativa utilizan el mecanismo de , éste estudio está en progreso para CPsV.