LAS PROTEÍNAS 54K Y 55K DE LOS OPHIOVIRUS CPSV Y MLBVV INTERACCIONAN IN VIVO CON LA PROTEÍNA PLASMODESMATA LOCATED PROTEIN 1 (PDLP1)

GABRIEL ROBLES LUNA; EDUARDO JOSÉ PEÑA; AGUSTINA DE FRANCESCO; ELIANA EVELINA OCOLOTOBICHE ; MARIA BELÉN BORNIEGO; CARINA ANDREA REYES; MARÍA LAURA GARCÍA

BUENOS AIRES

Congreso; X CONGRESO ARGENTINO DE VIROLOGÍA; 2011

ASOC. ARGENTINA DE MICROBIOLOGÍA

El ensanchamiento de las nervaduras (BV, big-vein) es una de las enfermedades que causa mayor daño en el cultivo de lechuga. El agente causal es Mirafiori lettuce big-vein virus (MLBVV), un virus multipartito (4 RNAs) con genoma a RNA de polaridad negativa, miembro de la familia Ophioviridae. En el RNA2 se encuentra el gen de la proteína denominada 55K (55kDa) cuya función se desconoce. El virus tipo de esta familia, Citrus Psorosis Virus (CPsV) contiene la misma organización genómica, encontrándose en el RNA2, el gen de la proteína 54K (54kDa) de la cual contamos con evidencias que indican su función en el movimiento viral. Objetivo: caracterizar las proteínas virales y determinar su localización subcelular con el objeto de aportar evidencias acerca de su función en el ciclo viral. Metodología: las proteínas virales fusionadas a proteínas fluorescentes (eGFP y RFP) en plásmidos binarios fueron expresadas en forma transitoria en hojas de Nicotiana benthamiana mediante agroinfiltración. Luego de 2 o 3 días post-agroinfiltración las hojas fueron observadas en un microscopio confocal o en uno invertido realizando medidas de Lifetime Imaging Microscopy (FLIM). Resultados: las proteínas 54K y 55K de CPsV y MLBVV se localizaron en plasmodesmos (PD) ya que co-localizaron con la proteína Plasmodesmata located protein1 (PDLP1) fusionada a RFP, utilizada como marcador de PD. La proteína PDLP1 pertenece a la familia PDLPs, descriptas como proteínas estructurales de PD que regulan el tráfico célula a célula. En aquellos virus que se mueven por túbulos (Amari et al. 2010) las PDLP mediarían el movimiento a las células vecinas, específicamente mediante interacciones directas PDLP con la proteína de movimiento viral (MP). Dado que estos túbulos se componen de subunidades de la MP, estudiamos la interacción in vivo de la proteína PDLP1:RFP con las proteínas 55K y 54K , además de la interacción entre ellas mismas. Midiendo FLIM y calculando el %FRET (eficiencia de transferencia de energía) se determinó que las proteínas 54K y 55K interaccionan con PDLP1, y se detectó la interacción 54K-54K y 54K-55K, indicando que habría un dominio de unión que permite la homo-oligomerización en plasmodesmos. Conclusiones: las proteínas codificadas en el RNA2 de los ophiovirus estudiados se localizan en plasmodesmos e interaccionan con PDLP1 al igual que en los virus guiados por túbulos. Estos resultados aportan evidencia de que estas proteínas se encuentran involucradas en el movimiento viral célula a célula.