Evaluación de la expresión y actividad de metaloproteasas de la matriz en la glándula mamaria bovina y su relación con la persistencia de las infecciones por Staphylococcus aureus durante la involución

BECCARÍA C; RENNA MS; CHERVAZ V; ANDREOTTI C; BARAVALLE C; SILVESTRINI P; PEREYRA EAL; VELÁZQUEZ NS; PIROLA SI; CALVINHO LF; DALLARD BE

La Plata- Buenos Aires

Encuentro; V Reunión Anual de la Red Latinoamericana de Investigación en Mastitis; 2019

Red Latinoamericana de Investigación en Mastitis

Evaluación de la Expresión y Actividad de Metaloproteasas de la Matriz en la Glándula Mamaria Bovina y su Relación con la Persistencia de las Infecciones por Staphylococcus aureus durante la Involución.Camila Beccaria1, María Sol Renna1,2, Victoria Chervaz2, Carolina Andreotti1, Celina Baravalle1,2, Paula Silvestrini1, Elizabet Pereyra1,2, Natalia Velazquez1, Silvana Pirola1, Luis Calvinho2,3, Bibiana Dallard1,21Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral (ICIVET-Litoral), Universidad Nacional del Litoral (UNL)/Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Tecnológicas (CONICET). Esperanza, Santa Fe, Argentina. 2Facultad de Ciencias Veterinarias (FCV), UNL. Esperanza, Santa Fe, Argentina. 3Estación Experimental Agropecuaria Rafaela, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). Rafaela, Santa Fe, Argentina. Introducción Staphylococcus aureus es el patógeno más frecuentemente aislado de casos de mastitis en Argentina y el mundo y causa infecciones intramamarias (IIM) con tendencia a la cronicidad que generan un extenso daño al tejido mamario. La glándula mamaria (GM) bovina es altamente susceptible a las nuevas IIM durante la etapa temprana del periodo de involución; etapa que se caracteriza por una intensa remodelación tisular que implica la muerte coordinada de células epiteliales y estromales mamarias, degradación de la matriz extracelular (MEC) y regeneración del tejido adiposo. Las metaloproteasas de la matriz (MMPs) son una familia de enzimas que escinden selectivamente sustratos como los de la MEC y péptidos de quimioquinas, actuando durante la remodelación normal de los tejidos y durante el daño tisular asociado a la inflamación. Las MMPs más estudiadas son MMP-2 (gelatinasa A) y MMP-9 (gelatinasa B) y su actividad está regulada por inhibidores tisulares de metaloproteasas (TIMPs). El objetivo de este trabajo fue evaluar la expresión proteica de MMP-2 y MMP-9 y sus inhibidores (TIMP-1 y TIMP-2) en tejido mamario y establecer diferencias en cuartos sanos e infectados con S. aureus durante la involución activa. Por otra parte, se evaluó la actividad gelatinolítica de MMP-2 y MMP-9 en secreción mamaria. La principal fuente de MMPs en la GM son los neutrófilos y macrófagos, por lo tanto en este trabajo se evaluó el porcentaje de células mononucleares (CMN) CD14+ presentes en sangre y secreción de animales sanos e infectados crónicos por S. aureus.Materiales y MétodosSe utilizaron vacas Holando Argentino no preñadas en la etapa final de la lactancia. Se tomaron como unidades experimentales los cuartos mamarios. Se utilizaron cuartos libres de IIM (n=15) y cuartos con IIM crónicas por S. aureus (n=15). Se definió como IIM crónica al aislamiento del mismo organismo a partir de tres muestras consecutivas a intervalos de 21 ds. Se obtuvieron muestras de tejido mamario a los 7, 14 y 21 ds luego del último ordeño. Muestras provenientes de cuartos sanos (n=5) e infectados crónicos por S. aureus (n=5) fueron incluidas en cada grupo (7, 14 y 21 ds). La identificación en tejido mamario de las enzimas MMP-2 y MMP-9 y de sus inhibidores (TIMP-1 y TIMP-2) se realizó por inmunohistoquímica utilizando anticuerpos específicos. Por otro lado se determinó la actividad enzimática de MMP-2 y MMP-9 en secreciones mamarias provenientes de cuartos sanos e infectados mediante zimografía en geles de poliacrilamida con el agregado de gelatina. Las muestras de secreción se obtuvieron inmediatamente antes del secado (hora 0), a las 12 hs y al día 1, 2, 3, 4, 5, 7, 14 y 21 post secado. También se evaluó el porcentaje de CMN presentes en sangre y secreción mamaria de animales sanos e infectados crónicos por S. aureus mediante inmunomarcación con el anticuerpo anti CD14-APC y adquisición por citometría de flujo (Attune, NxT Acoustic Focusing Cytometer A24860). Resultados La inmunomarcación para MMP-2, MMP-9, TIMP-1 y TIMP-2 se asoció al citoplasma de células epiteliales alveolares y conductos excretores del parénquima mamario, tanto en cuartos sanos como en cuartos infectados. Asimismo, en el estroma interalveolar y en el interior de conductos y alvéolos se observaron macrófagos y neutrófilos con su citoplasma inmunoreactivo para las diferentes proteínas evaluadas. La expresión de MMP-2 se vio influenciada por el proceso infeccioso (p