Evaluación de la activación del factor de transcripción nuclear NFKb en glándula mamaria murina infectada experimentalmente con dos cepas de Staphylococcus aureus de origen bovino

PEREYRA E.A.L.; SILVESTRINI P; SACCO S.C; BECCARÍA C.; BARAVALLE C; RENNA M.S; CALVINHO L.F; DALLARD B.E

Esperanza- Santa Fe

Congreso; X Reunión Argentina de Patología Veterinaria- RAPAVE 10º Seminario de la Fundación de Charles Louis Davis en Argentina; 2016

Facultad de Ciencias Veterinarias- UNL

EVALUACIÓN DE LA ACTIVACIÓN DEL FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN NUCLEAR (NF-КB) EN GLÁNDULA MAMARIA MURINA INFECTADA EXPERIMENTALMENTE CON DOS CEPAS DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS DE ORIGEN BOVINO EVALUATION OF NUCLEAR TRANSCRIPTION FACTOR (NF-КB) ACTIVATION IN MURINE MAMMARY GLAND INFECTED WITH TWO BOVINE STAPHYLOCOCCUS AUREUS STRAINS Pereyra EAL1,2, Silvestrini P1,2, Sacco SC1,2, Beccaria C1,2, Baravalle C1,2, Renna MS1,2, Calvinho LF3,4, Dallard BE1,21Laboratorio de Biología Celular y Molecular Aplicada, Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Litoral. 2Instituto de Ciencias Veterinarias del Litoral (ICIVET-Litoral), UNL-CONICET. 3Estación Experimental Agropecuaria Rafaela, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (INTA). 4Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Litoral. epereyra@fcv.unl.edu.arEl factor de transcripción nuclear-kappa B (NF-кB) juega un rol clave en la respuesta inmune frente a infecciones bacterianas. Es un complejo de proteínas homo o heterodiméricas donde el complejo p65-p50 es el más abundante. La activación de NF-кB, involucra la fosforilación y rápida degradación de la proteína inhibitoria (IκB) la cual lo mantiene secuestrado en el citoplasma. Luego de su activación el complejo proteico se transloca al núcleo, ejerciendo así la acción transcripcional de ciertos genes que involucran la síntesis y secreción de citoquinas proinflamatorias1. Se propone como objetivo identificar y cuantificar células con NF-κB activo luego de la inoculación experimental en glándula mamaria (GM) murina de dos cepas de Staphylococcus aureus de origen bovino con características genéticas, clínicas y epidemiológicas diferenciales mediante inmunohistoquímica (IHQ). Para las inoculaciones experimentales se utilizaron dos cepas de S. aureus de origen bovino seleccionadas según criterios clínicos y epidemiológicos, utilizando técnicas bacteriológicas tradicionales y técnicas de biología molecular que permitieron diferenciarlas genéticamente. La cepa A, aislada solo una vez durante la lactancia a partir de un animal con infección intramamaria (IIM) clínica (cepa no persistente) y la cepa B de un animal con IIM crónica aislada durante toda la lactancia (cepa persistente). Se utilizaron 3 grupos de ratones en lactancia que fueron inoculados en forma intramamaria con las cepas A, B y solución fisiológica (control). Los ratones fueron sacrificados a diferentes tiempos post inoculación (pi): 6, 12, 24, 48, 72, 96, 120, 168, 216 y 264 hs. Se extrajeron muestras de tejido mamario para la realización de IHQ utilizando un anticuerpo primario específico (anti-NF-κBp65, Santa Cruz Biotechnology). El NF-κB activado fue detectado por la localización nuclear de p65 en células epiteliales (EP) y estromales (ES) de la GM y se cuantificó utilizando el programa Image-Pro Plus 3.0.1. Se consideraron como células positivas aquellas que mostraron tinción nuclear intensa y el resultado se expresó como porcentaje de células intensamente marcadas. Los porcentajes de células EP y ES inmunomarcadas se vieron influenciados por los tratamientos aplicados (P