Evidencia Serológica de la Circulación de Agentes del Complejo Respiratorio Bovino en el Área Centro Oeste Santafesina

BECCARIA C.; MOSSO P.; PAZ M

Santa Fe

Encuentro; XIV Encuentro de Jóvenes Investigadores de la Universidad Nacional del Litoral y V Encuentro de Jóvenes Investigadores de Universidades de Santa Fe.; 2010

Organizado por la Universidad Nacional del Litoral, Universidad Católica de Santa Fe y Universidad Tecnológica Nacional (Reg. Santa Fe)

EVIDENCIA SEROLÓGICA DE LA PRESENCIA DE AGENTES DEL COMPLEJO RESPIRATORIO BOVINO EN EL ÁREA CENTRO-OESTE SANTAFESINA. Beccaria Camila, Mosso Pamela, María E. Paz. Introducción: Las enfermedades virales respiratorias en bovinos, son causas predisponentes de severas patologías y de importantes pérdidas económicas en el país y el mundo. Los agentes virales involucrados en el denominado Complejo Respiratorio Bovino (CRB) comprenden miembros de varias Familias, como : Herpesviridae (Bo HV 1); Paramixoviridae (VRSB y PI 3) ; Adenoviridae (Adenovirus bovino tipo 3); también se incluyen agentes bacterianos como las Pasteurella hemolítica y multócida, Haemophilus sommnus y Mycoplasma bovis, y causan cuadros clíncos agudos denominados "Fiebre del embarque", "Neumonía Enzoótica" que evidencian un síndrome en el que intervienen virus y bacterias que agravan el cuadro, junto a otros factores comprometen además el sistema inmune, produciendo signos y síntomas característicos. De esta manera las situaciones estresantes como castración, descorne, destete, transporte, cambios climáticos bruscos, hacinamiento, son factores que contribuyen a la presentación del CRB. Los brotes de procesos respiratorios se producen con mayor intensidad en animales jóvenes (1er semestre de vida a los 2 años), desatándose en ocasión de arreos, viajes o cambios de hábitat. Dado que se hace sumamente difícil controlar todas las variables que se presenten, es comprensible que la enfermedad pueda presentarse aún en animales vacunados. El Herpesvirus Bovino tipo 1 (BoHV-1) en su forma respiratoria puede presentarse como enfermedad con un grado de morbilidad entre el 10 al 90% y además de estos cuadros generar problemas en distintos aparatos. Los signos clínicos respiratorios son similares a los producidos por los otros virus, pero se diferencian por encontrarse pequeñas úlceras en mucosas respiratoria y bucal, además de conjuntivitis y lagrimeo. El Virus Sincicial Respiratorio Bovino (VRSB) afecta a terneros especialmente cuando se hallan confinados y poseen signos clínicos como fiebre, lagrimeo, secreciones nasales, depresión, disnea y tos. La morbilidad es alta y la mortalidad es baja, pero se han observado animales que llegan a morir, aún siendo los mejor nutridos, lo que ha llevado a especular que tal vez algunos nutrientes predispondrían a la proliferación del virus. Parainfluenza tipo 3 (PI-3) está asociado a procesos que se complican con infecciones bacterianas, hallándose una prevalencia viral de hasta 90% en animales clínicamente sanos y se ha detectado solo virus sin presencia bacteriana. La presentación está caracterizada, por la presencia de signos leves, provocando finalmente una neumonía intersticial con consolidación de lóbulos. Los Adenovirus bovinos y en especial el tipo 3, causan cuadros en el tracto respiratorio superior, pudiendo llegar a producir una neumonía, pero en nuestro país la evidencia de circulación no se correlaciona a cuadros patológicos. Es necesario tener presente que los factores anátomo- fisiológicos sitúan a los bovinos en una desventaja comparativa con otras especies animales, en cuanto a su capacidad respiratoria, diferencias que predisponen al bovino a padecer neumonías y dificultades para corregirlas, entre otras se citan, a la gruesa pleura poco distensible, pulmones pequeños, menor número de macrófagos alveolares y menor presión para el intercambio gaseoso. Por su parte la infección por virus resulta predisponente a la infección bacteriana secundaria, incrementándose de esta manera la susceptibilidad del tejido respiratorio con destrucción de cilias y células epiteliales. Otros virus alteran las funciones celulares de defensa dañando macrófagos y neutrófilos con efecto inmunosupresor; destruyen las delicadas paredes alveolares por la severa inflamación y alteran la superficie de las células respiratorias favoreciendo la adherencia de las bacterias. Los virus del CRB penetran por vía aerógena y por su tamaño llegan a células de faringe, tráquea, bronquios y bronquiolos, introduciéndose y replicando en las mismas. Los animales que presenten buenas condiciones físico-inmunológicas pueden resolver la infección mediante mecanismos de defensa inespecíficos y fagocitosis. De hallarse inmunodeprimidos por estrés y causas mencionadas anteriormente, se acentúa la proliferación viral y se ve incrementada la inmunodepresión, lo que favorece la proliferación bacteriana de asociación. El diagnóstico de estas infecciones se halla basado en la signología clínica, exámenes post-mortem y análisis de laboratorio mediante un diagnóstico directo o indirecto, sobre lo cual se asienta el diferencial entre las mismas. Para todas estas infecciones se puede intentar el aislamiento del agente respectivo desde muestras de hisopados nasofaríngeos, lavados broncoalveolares, tejido pulmonar o bien, la demostración indirecta de las infecciones por medio de diversos tests serológicos: ELISA, Inmunofluorescenciia Indirecta (IFI); Neutralización (NT); Inmunoadsorción (IHA); HD. Objetivos -Evidenciar en forma indirecta la circulación de agentes del CRB, en especial del VSRB, PI 3 y BoHV 1. -Relacionar presencia de Anticuerpos con las diferentes patologías a que obedecen, para cada uno de los virus. -Correlacionar cuadros clínicos respiratorios con presencia de anticuerpos. -Aportar datos epidemiológicos de los virus integrantes del CRB.      Metodología Se extrajeron a 138 terneros muestras de sangre, a razón de 8-10 ml por punción yugular, sin anticoagulante. Las edades de los animales oscilaban entre 1 y 4 meses, provenientes de diez (10) establecimientos de cría extensivos sin encierre a corral, distribuidos en el Departamento San Cristóbal (cuenca oeste santafesina) de la Provincia de Santa Fe, en los cuales se registran anualmente casos clínicos de enfermedades respiratorias, de diferente intensidad y presentación , llegando a presentar muertes por esta causa. Se tomaron muestras por establecimiento en un número variable entre 8-18 de animales afectados y de convivientes sanos. Se separaron los sueros libres de hemólisis, los que fueron congelados hasta su procesamiento. Se realizaron pruebas de Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) para detección de anticuerpos con reactivos comerciales marca VMRD:FITC conjugate 210-69 IBR;Positive /Negative control 211-P IBR-211-N IBR, FA substrate slide 210-88-IBR. FITC conjugate 210-53 PI 3,FA substrate slide 210-88 PI 3 y FITC conjugate 210-63 BSRV,Positive/Negative controls IFA 211 P y N -PI 3 ,substrate slides 210-88-BRSV. Se procedió al procesamiento de sueros según las recomendaciones del fabricante: - Los slides conteniendo improntas de las células con los correspondientes antígenos virales(IBR-VSRB y PI3) se colocaron a temperatura ambiente para orearlos. -En cada well(celda) se depositaron 50 microlitros de las diluciones séricas por duplicado, habiéndose elegido la dilución 1/8 realizada el buffer diluyente pH 7.2. -Se incubaron por 30 minutos a 37ºC en cámara húmeda.A continuación se lavaron con buffer pH 9 por 10 minutos. -Luego se colocaron 50 microlitros de las Ig marcadas sobre cada una de las wells.Se incubaron nuevamente por 30 minutos de igual manera que en el paso de incubación anterior. -Nuevamente al término de la incubación se repitió el paso de lavado. -Una vez oreadas las wells(celdas) con las improntas celulares ya teñidas y antes que se sequen completamente, se efectuó el montaje con glicerina bufferada y fueron detalladamente observadas en microscopio de inmunofluorescencia con 100-250X , confirmando los positivos en 400X. Resultados En los establecimientos muestreados se detectaron animales reactores a los tres agentes virales involucrados en CRB, el porcentaje hallado en cada establecimiento es significativo sobre lo muestreado. La mayor proporción de animales reactores fue para BoHV 1 y VRSB. Conclusiones Los resultados evidencian la presencia de anticuerpos fluorescentes para los tres virus integrantes del CRB. Las proporciones de reaccionantes positivos para cada uno de los virus estudiados superan el 30%. Estos datos muestran la importancia de los procesos respiratorios de origen viral en bovinos jóvenes, y posiblemente esto se deba a que no reciben inmunógenos y que la protección materna calostral inicial resulta insuficiente o ineficáz. Debemos señalar que el área muestreada posee antecedentes de prevalencias de algunos virus del complejo (BoHV 1 y VSRB) en los años 2000/2002, aunque la población muestrada era pequeña . Recurrir a un buen programa de vacunación con el complemento de otras medidas, tendería a minimizar las condiciones favorables para la presentación de afecciones del complejo, a la vez que se establecería una presión inmunológica poblacional.Se reduciría la aparición de casos si se utilizan biológicos específicos. Asimismo consideramos de gravitante importancia el aporte del laboratorio, fundamentalmente para esclarecer y mejorar el diagnóstico clínico diferencial.