Especies excitadas de Vitamina B2 liposoluble, fotopromovidas por luz, inducen apoptosis en células de carcinoma escamoso SCC-13. Su aplicación en Terapia Fotodinámica

ANDREA VIRGINIA JUAREZ; ERNESTO HAGGI; ALICIA TORRES; PATRICIA PONS

Bogota

Congreso; V Congreso Iberoamericano de Productos Naturales; 2016

La fotoactivación de la Vitamina B2 modificada (B2LS) para adquirir propiedades liposolubles acetilando sus grupos oxidrilos, genera especies excitadas de este sensibilizador, que a su vez, produce especies reactivas de oxígeno (ERO). Por esta razón B2LS podría ser aplicada en Terapia Fotodinámica (TFD)1. Este método consiste en administrar un fotosensibilizador que se excita con luz visible, produciendo estrés oxidativo por el aumento en los niveles de ERO, causando la muerte de células tumorales. Nos propusimos estudiar el efecto de las ERO generadas por la fotooxidación de B2LS en células humanas de carcinoma escamoso (SCC-13). Para estudiar la selectividad de la TFD- B2LS sobre células tumorales se utilizó la línea de células tumorales SCC-13 y de queratinocitos normales HaCat. Ambas líneas celulares se incubaron en DMEM con B2LS (50µM) por 3h y se irradiaron con luz monocromática de =446 nm, correspondiente a la máxima absorbancia de B2LS en el espectro visible a diferentes densidades de energía. Los resultados obtenidos demuestran una mayor selectividad en la incorporación del fotosensibilizador en células tumorales, respecto a las células normales, evaluado por citometría de flujo. El ensayo del Rojo Neutro permitió demostrar que B2LS no es citotóxica en oscuridad, pero fotoactivada, genera disminución de la viabilidad de las células tumorales en una relación directa con la dosis de luz, sin afectar a las células normales. Estudios ultraestructurales por Microscopía Electrónica de Transmisión, demostraron que las células SCC-13 tratadas con B2LS e irradiadas, presentan características apoptóticas tales como, condensación de la cromatina y presencia de cuerpos apoptóticos. También se corroboró la presencia de apoptosis por citometría de flujo (Anexina V-PE/7AAD) e incremento del número de células TUNEL positivas. Los estudios bioquímicos permiten concluir que la apoptosis inducida por B2LS es caspasa dependiente.Empleando la sonda 2,7-dihidrodicloro fluoresceína (DCF), se observó que B2LS activada, incrementa los niveles de ERO, por citometría de flujo y microscopia de fluorescencia. Además, se demostró que dichas especies reactivas serían las responsables de la disminución de la viabilidad observada, ya que la preincubación de las células SCC-13 con el antioxidante Trolox (20μM), atenuó el efecto citotóxico de la TFD. Frente a estos resultados podemos concluir que B2LS es inocuo en oscuridad pero al ser fotoactivado genera ERO capaces de producir la muerte de células tumorales por apoptosis vía caspasa dependiente. Estas alentadoras conclusiones, sugieren que B2LS puede ser un potencial y eficiente fotosensibilizador para ser aplicado en terapia fotodinámica.