La terapia Fotodinámica con riboflavina en células de carcinoma escamoso.

A. V. JUAREZ; N. BOETTO; A TORRES; P PONS

Córdoba

Jornada; XIV Jornadas de Investigación Científica, Facultad de Ciencias Médicas; 2013

Secretaria de Ciencia y Tecnica. Facultad de Ciencias Medicas. UNC

La terapia fotodinámica (TFD) consiste en la administración de un fotosensibilizador seguido de su activación con luz visible. Esta activación produce la formación de especies reactivas de oxígeno (ERO), principalmente oxígeno singlete que causan la muerte celular de las células tumorales [1]. Actualmente un tema de gran interés es la búsqueda de un fotosensibilizador ideal [2], la Riboflavina es un eficiente fotosensibilizador por lo que podría ser utilizado en TFD. Objetivo: evaluar la respuesta de células de carcinoma escamoso (SCC-13) a la TFD mediada por riboflavina y por tetraacetato de riboflavina (RFTA) determinando el tipo de muerte celular. Con la finalidad de constatar la generación de ROS por riboflavina y RFTA con λ444nm se utilizó 3OHpiridina y 9,10-dimetilantraceno (DMA), drogas que se descomponen ante 1O2. La señal de absorbancia de 3OHpiridina en presencia de riboflavina e iluminada por 30seg decayó 28% mientras que DMA con RFTA iluminada 2seg disminuyó 78,7% demostrando que ambos fotosensibilizadores generan 1O2. Células SCC-13 fueron incubadas con DMEM, riboflavina o RFTA (50µM-2h) e irradiadas con 444nm-37mW/cm2. La viabilidad de células sometidas a TFD con ambas riboflavinas disminuyó respecto a los controles en forma dosis de luz dependiente. El tratamiento fotodinámico con ambos fotosensibilizadores disminuyó la tasa de proliferación celular. La fluorescencia nuclear con Hoechst demostró que el tratamiento fotodinámico genera condensación de la cromatina y fragmentación nuclear característicos del proceso apoptótico. Por microscopia óptica y microscopia electrónica los núcleos presentaron condensación y marginación de la cromatina en la periferia nuclear y numerosas células con formación de cuerpos apoptóticos. Células sometidas a TFD con dosis lumínicas mayores presentaron vacuolas citoplasmáticas, alteraciones de las organelas y ruptura de la membrana plasmática concomitante con un proceso necrótico. RFTA generó mayor producción de ERO en comparación con riboflavina, los niveles de ERO intracelulares se detectaron con 2,7-dihidrodicloro-fluoresceína. En ausencia de activación lumínica riboflavina y RFTA no presentaron efectos citotóxicos detectables. Estos resultados sugieren que ambos compuestos estudiados podrían ser eficaces fotosensibilizadores en la aplicación de TFD.